sh 腫瘤標(biāo)志物ELISA試劑盒
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- 公司名稱 上海雙贏生物試劑有限公司
- 品牌
- 型號(hào) sh
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2017/4/26 18:54:50
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腫瘤標(biāo)志物ELISA試劑盒對(duì)檢測(cè)標(biāo)本的測(cè)定十分廣泛，標(biāo)本形態(tài)均為液體。大部分 ELISA 檢測(cè)均以血清為標(biāo)本（血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清），這是因?yàn)檠鍢?biāo)本只要待血清自然凝固、血塊收縮后即可取得，來源方便，操作簡(jiǎn)單。但不可因?yàn)楹?jiǎn)單而掉以輕心，血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)，應(yīng)注意避免溶血，保存血清自采集時(shí)就應(yīng)注意無菌操作，也可加入適當(dāng)防腐劑。
腫瘤標(biāo)志物ELISA試劑盒操作步驟：
實(shí)驗(yàn)開始前，請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時(shí)，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
4. 每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同生物素標(biāo)記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。
注意事項(xiàng)：
1） 在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃，必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。
2） 我們提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測(cè)，對(duì)收集后及時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。 1-3 天左右檢測(cè)的樣本可儲(chǔ)存在 4℃ 備用。如有特殊原因需要周期性收集標(biāo)本，請(qǐng)將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在 -20℃ 或 - 70℃ 條件下保存，避免反復(fù)凍融。
實(shí)驗(yàn)技巧：腫瘤標(biāo)志物(TumorMarker)是反映腫瘤存在的化學(xué)類物質(zhì)。它們或不存在于正常成人組織而僅見于胚胎組織，或在腫瘤組織中的含量大大超過在正常組織里的含量，它們的存在或量變可以提示腫瘤的性質(zhì)，借以了解腫瘤的組織發(fā)生、細(xì)胞分化、細(xì)胞功能，以幫助腫瘤的診斷、分類、預(yù)后判斷以及治療指導(dǎo)。
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