L-茶氨酸
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- 更新時間 2024/11/14 15:36:05
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L-茶氨酸
英文名稱 : L-Theanine CAS : 3081-61-6 分子式 : C7H14N2O3 分子量 : 174.2
L-茶氨酸
慢病毒感染快速指南
1. 將目的細胞按 30%匯合度接種到 24 孔板,約 3-5×104細胞數(shù)/孔,不同細胞因為細胞大小不同細胞數(shù)量會不同,快速指南以細胞數(shù)量為 5×104為例,加入 500uL wan全培養(yǎng)基進行細胞培養(yǎng)。
2. 接種后 12-20h 感染陰性對照慢病毒(接種細胞至病毒感染細胞時間不宜太長,否則細胞增殖影響細胞密度不利用后期抗性篩選)。
3.加病毒量計算方法:(細胞數(shù)×MOI 值/病毒滴度)×103=病毒量(uL),加病毒量見下表。同時加入 Polybrene,每孔加 0.25uL,濃度為 10mg/mL Polybrene,細胞培養(yǎng)液中終濃度為5ug/mL。
4.感染 16-20h 后更換培養(yǎng)基,棄去培養(yǎng)基,每孔加入 500uL 新鮮的培養(yǎng)基。
5.感染后 48-96h 顯微鏡觀察熒光。(注:如果 48h-96h 期間細胞匯合度達到 100%,請及時傳代培養(yǎng))。
6.建議將 48 孔板細胞進行傳代,傳代 12 孔板,后繼續(xù)觀察熒光,根據(jù)細胞狀態(tài)和熒光細胞比例綜合判斷細胞感染最佳 MOI 值。一般選擇細胞生長良好,感染效率 80%左右的感染條件作為最佳感染條件。(注:100%熒光感染不一定為細胞最佳 MOI 值,因為可能會造成細胞慢病毒感染拷貝數(shù)太高,影響細胞狀態(tài)。