一、Oligo高通量DNA合成儀用于合成結(jié)構(gòu)上類(lèi)似DNA或RNA的寡核苷酸的自動(dòng)化儀器。一般應(yīng)用于固相合成法，每次將一個(gè)核苷酸加到所接長(zhǎng)的寡核苷酸鏈上，加入每一個(gè)核苷酸都利用相同的化學(xué)反應(yīng)與相應(yīng)的嘌呤或嘧啶堿基衍生物作用。

二、Oligo高通量DNA合成儀的特點(diǎn)：

（1）包括一個(gè)靈活的合成協(xié)議編輯器，它允許操作員修改所包含的協(xié)議，并將它們保存在一個(gè)新名稱下，或者從頭開(kāi)始編寫(xiě)協(xié)議。協(xié)議編輯可以在Excel中完成。對(duì)于不同的合成規(guī)模和序列長(zhǎng)度，很容易編輯特殊協(xié)議。比如，可以給耦合緩慢的堿基對(duì)一個(gè)特別的延長(zhǎng)的耦合時(shí)間。如果必要的話，可以給所有單體額外的耦合反應(yīng)時(shí)間。

（2）軟件簡(jiǎn)單易用。在計(jì)算機(jī)或平板的Excel表中創(chuàng)建運(yùn)行數(shù)據(jù)后，可使用Wi-Fi等網(wǎng)絡(luò)連接或標(biāo)準(zhǔn)U盤(pán)傳輸?shù)絻x器上。實(shí)驗(yàn)運(yùn)行中，可以從PC端收集實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

（3）性能：

OligoMakerX12可以在1小時(shí)內(nèi)平行合成12條20對(duì)的寡核苷酸。  

OligoMaker48可以在2小時(shí)內(nèi)平行合成多達(dá)48條20對(duì)的寡核苷酸。  

OligoMaker96可以在3小時(shí)內(nèi)平行合成多達(dá)96條20對(duì)的寡核苷酸。  

OligoMaker192可以在4小時(shí)內(nèi)平行合成多達(dá)192條20對(duì)的寡核苷酸。  

（4）可在IUPAC-IUB標(biāo)準(zhǔn)規(guī)則下合成10、50、200和1000nmol規(guī)模的核苷酸。  

（5）兩個(gè)反應(yīng)盤(pán)，一個(gè)盤(pán)可以加載和合成核苷酸，另一個(gè)盤(pán)準(zhǔn)備進(jìn)行凈化步驟。  

OligoMaker48可以升級(jí)為OligoMaker96和OligoMaker192；  

OligoMaker96可以升級(jí)為OligoMaker192。  

（6）DNA的固相合成。即DNA3'端固定于基質(zhì)上，然后沿3'向5'方向依此添加核苷酸直至合成所需的DNA片段。不同于應(yīng)用DNA聚合酶的DNA合成。

三、合成過(guò)程：

*個(gè)堿基的3‘末端固定在樹(shù)脂上，下一個(gè)堿基的5’-OH用二對(duì)甲氧三苯甲基DMT保護(hù)，堿基上的氨基用苯甲酸保護(hù)，然后對(duì)3‘-OH用氨基磷酸化合物進(jìn)行活化。

1。1個(gè)堿基的5’-OH和下個(gè)堿基的3‘-OH形成亞磷酸三酯，  

2。然后用碘氧化成磷酸三酯  

3。加入C2H6CL2除去第二個(gè)堿基5’-OH上的保護(hù)劑DMT循環(huán)進(jìn)行加入下一個(gè)堿基合成完畢后  

四、亞磷酰胺寡核苷酸合成為例介紹該類(lèi)儀器的一般操作步驟。亞磷酰胺DNA合成的試劑有：保護(hù)堿基的5／—DMT，A、G、C、T亞磷酰胺單體，四唑偶聯(lián)催化劑，乙酐，N—甲基咪唑封閉試劑，TCA脫保護(hù)溶液，12氧化混合物，乙腈清洗溶劑，氨水切除溶液。

五、使用步驟如下：

1、仔細(xì)檢查合成儀上所有試劑瓶中的試劑量，必要時(shí)換掉試劑瓶，特別注意乙腈的量，因?yàn)樵撊軇┯昧枯^大。  

2、將標(biāo)記好的清潔的收集瓶裝在合成儀上。  

3、將要合成的DNA序列輸入合成儀。  

4、檢查選擇的合成步驟是否正確。  

5、選擇結(jié)束方法：TritylOffAuto是儀器的原始狀態(tài)，若打算以5，—DMT基團(tuán)連接純化寡核苷酸，將其轉(zhuǎn)變?yōu)門(mén)ritylOnAuto結(jié)束狀態(tài)。  

6、選擇結(jié)束方法，一般為系統(tǒng)的原始狀態(tài)。  

7、在每個(gè)柱監(jiān)視器的Username下，輸入你所希望的保存名字。  

8、以代碼代替相應(yīng)的DNA序列標(biāo)記每一個(gè)收集瓶。  

9、打印出每一個(gè)柱設(shè)置的詳細(xì)資料。  

10、檢查打印出來(lái)的資料是否正確。  

11、運(yùn)行StartColumn步驟檢查每一個(gè)柱的位置，確保合成儀上合成柱處于正確的位置。  

12、檢查連接在合成儀上的溶劑殘留（廢液瓶）是否充滿。  

13、如果分部收集器用來(lái)收集每個(gè)DMT脫保護(hù)步驟的流出物，確保試管充分清潔干凈，并打開(kāi)分部收集器，確保DMT廢液管路通向分部收集器。  

14、啟動(dòng)循環(huán)，運(yùn)行開(kāi)始程序清洗試劑管路，除去原來(lái)的試劑。

六、注意：TritylOnAuto表示在合成寡核苷酸的5’端核苷酸帶有一個(gè)DMT，并將其從固相載體上切下來(lái)，儲(chǔ)存在收集瓶中；TritylOffAuto表示在合成寡核苷酸的5，端核苷酸沒(méi)有保護(hù)基團(tuán)，將其從固相載體上切下來(lái)，儲(chǔ)存在收集瓶中；TritylOnManual表示合成寡核苷酸的5’端核苷酸帶有一個(gè)DMT，寡核苷酸沒(méi)有從固相載體上切下來(lái)，而是保留在合成柱中；TritylOffManual表示在合成寡核苷酸的5，端核苷酸沒(méi)有保護(hù)基團(tuán)，寡核苷酸沒(méi)有從固相載體上切下來(lái)，而是保留在合成柱中。