石蠟冰凍切片TUNEL凋亡熒光
- 公司名稱 上海研謹生物科技有限公司
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- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2024/8/30 16:08:06
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應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產業(yè) |
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石蠟冰凍切片TUNEL凋亡熒光
TUNEL凋亡熒光實驗原理
dUTP缺口末端標記(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling,TUNEL) 法檢測細胞凋亡的原理是當細胞發(fā)生凋亡時,DNA內切酶被激活,核小體間的基因組DNA被切斷,暴露的3-0H可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(TerminalDeoxynucleotidyl Transferase, TdT)加上帶有熒光素FITC標記的dUTP,從而可以通過熒光顯微鏡進行檢測。
TUNEL凋亡熒光實驗意義
1.TUNEL法是一種分子生物學與形態(tài)學相結合的研究方法,可對完整的單個凋亡細胞或者凋亡小體進行原位染色,可以準確反映細胞凋亡典型的生物化學和形態(tài)特征。
2.可用于石蠟切片、冰凍切片、培養(yǎng)的細胞等進行細胞凋亡檢測,靈敏度遠比一般的組織化學和生物化學方法要高。
3.操作簡便快捷,在細胞凋亡的研究中被廣泛采用。
TUNEL凋亡熒光實驗步驟:
1.石蠟切片TUNEL顯色法:
①石蠟切片常規(guī)脫蠟至水,脫蠟劑= =甲苯,至水劑乙醇;
②PBS漂洗3*5 min; .
③加入蛋白酶K工作液379C反應15-30 min, PBS漂洗3x5 min;
④4%多聚甲醛(pH7 4的PBS)室溫固定15-30 min, PBS漂洗3x5 min;
⑤浸入封閉液(3%H202)室溫封閉10 min, PBS漂洗3x5 min;
⑥參考使用試劑盒的說明書配制適量的TUNEL檢測液,其中含有TdT酶、熒光標記液、TUNEL檢測液;
⑦樣品上加入適量TUNEL檢測液,37°C避光孵育60 min, PBS漂洗3x5 min;
⑧選擇是否用DAPI復染細胞核;
⑨使用抗熒光淬滅封片液封片后在熒光顯微鏡下進行觀察。
2.冰凍切片TUNEL顯色法:
①新鮮組織經處理后,立即在恒冷冰凍切片機內切片,厚度為5~6 um;
②防脫玻片,貼片,室溫陰干約12h;③4%多聚甲醛(pH7 .4的PBS)室溫固定10 min,PBS漂洗3x5 min;
④浸入封閉液(3%H20O2) 室溫封閉10 min, PBS漂洗3x5 min;
⑤浸入通透液(0.1%Triton X-100溶于PBS中),室溫通透30 S-2 min;
⑥參考使用試劑盒的說明書配制適量的TUNEL檢測液,其中含有TdT酶、熒光標記液、TUNEL檢測液;
⑦樣品上加入適量TUNEL檢測液,37°C避光孵育60 min, PBS漂洗3x5 min;
⑧選擇是否用DAPI復染細胞核:
⑨使用抗熒光淬滅封片液封片后在熒光顯微鏡下進行觀察。
結果展示
實驗完成周期及交付標準
1.實驗周期: 1-2周
2.交付標準:蠟塊、切片、染色圖片.實驗報告(實驗步驟、試劑、耗材等)
需確認的信息
1.樣本的種屬
2.樣本的類型(固定的組織or蠟塊or切片)
3.是否提供試劑盒
4.拍照要求
實驗代做服務: