淋巴細胞培養(yǎng)基（染色體病）

產品名稱：

通用名稱：淋巴細胞培養(yǎng)基（染色體?。?span style="color:#000000">

英文名稱：Lymphocyte Medium

包裝規(guī)格：4ml/瓶，56 瓶/盒

預期用途：

淋巴細胞培養(yǎng)基為細胞標本前處理試劑，用于淋巴細胞增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)后的淋巴細胞用于體外診斷，該產品不用于 治療性用途。 主要組成成分： RPMI1640、小牛血清、肝素、PHA 等。

使用方法：

1. 采血與接種

  采取外周血 1-2ml，在無菌條件下立即種血 0.3ml（7 號針頭約 20 滴）至淋巴細胞培養(yǎng)基內，充分搖勻。

2. 培養(yǎng)

  將培養(yǎng)瓶放入 37℃恒溫箱中培養(yǎng) 68-72 小時，培養(yǎng)期間注意觀察培養(yǎng)基有無凝血、溶血或長菌的現(xiàn)象 （可培養(yǎng) 24 小時后將培養(yǎng)基輕搖一次，以便細胞可以獲得充分的營養(yǎng)）。

3. 制片

3.1 秋水仙素處理：

  在終止培養(yǎng)前，加入濃度為 20μg/ml 的秋水仙素 1-3 滴（7#針頭豎滴）后，繼續(xù)培養(yǎng) 2-3 小時；

3.2 收細胞：

  將培養(yǎng)完成的培養(yǎng)基倒入對應的離心管內，以 1500rpm 離心 7-10 分鐘，棄去上清液；

3.3 低滲：

  向離心管內加入 37℃預溫的低滲液（0.075mol/L 氯化/鉀溶液）8ml，用吸管反復吹勻 10 次，置 37℃水浴箱 中水浴 25-35 分鐘；

3.4 預固定：

  向低滲的細胞懸液內緩慢加入新配制的固定液（甲醇和乙酸按 3:1 的比例混合）1-1.5ml，輕輕混勻后置室溫 靜置 20 分鐘后，1500rpm 離心 7-10 分鐘，棄去上清液；

3.5 固定：

  沿管壁緩慢加入現(xiàn)配的預溫至 37℃的新配固定液約 8ml 輕輕混勻，然后 2000rpm 離心 10 分鐘。加入固定液 再次固定，棄上清，重復固定 1-2 次。用固定液將沉淀調成細胞懸液（不宜太濃，一般加固定液至 0.5ml）在冰 片上滴片，每張片上滴 2 滴。

3.6 烤片：

  立即放入 75℃烤箱中烤片 3 小時。

4. 顯帶

  先將玻片放在預溫至 37℃的 0.25%胰酶溶液中（pH=7.2-7.4）消化 1 分左右，每次作用時間并不*相同。 可先試一張片子，再根據顯帶效果調整胰酶作用時間，再放在預溫至 37℃的 0.85% NACl 溶液中漂洗兩次，在預 溫至 37℃的吉姆薩染液中染色 10 分鐘，自來水沖洗干凈，用吹風機吹干，即可閱片。

注意事項：

1. 采集的外周血若立即接種則無需加肝素抗凝，如需保存標本，應加肝素抗凝；

2. 采集的外周血在冰箱 4℃保存，保存期不亦超過一周。

儲存條件及有效期：

  4-8℃保存，有效期 1 個月，-5℃以下保存，有效期 12 個月，可穩(wěn)定至保質期末。