陶術(shù)  C0066  人 CD34 + 細(xì)胞富集試劑盒（陰性選擇）

陶術(shù) 人 CD34+細(xì)胞富集試劑盒（陰性選擇）

產(chǎn)品貨號(hào)：C0066

產(chǎn)品名稱：人 CD34 + 細(xì)胞富集試劑盒（陰性選擇）

產(chǎn)品規(guī)格：2mL (for 1×10^9 cells)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

TargetMol 的人 CD34+ 細(xì)胞分選試劑盒 (陰選) 提供超順磁性微珠，采用陰性分選法，從人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）中分離出 CD34+ 細(xì)胞。原理是選用生wu素（biotin）標(biāo)記的單克隆抗體對(duì)非目標(biāo)細(xì)胞（非 CD34+ 細(xì)胞）進(jìn)行標(biāo)記，然后通過(guò)鏈霉親和素（streptavidin）標(biāo)記的磁珠對(duì)非目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行清除，從而達(dá)到人外周血 CD34+ 細(xì)胞分選的目的。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

活性高：分選后細(xì)胞功能保持完好，無(wú)異常激活，無(wú)抗體和磁珠標(biāo)記。

易操作：無(wú)需使用分離柱，通過(guò)磁力架即可實(shí)現(xiàn)目標(biāo)細(xì)胞分離。

速度快：最快 30 min 即可完成 CD34+ 細(xì)胞富集。

富集效率高：一步富集可達(dá)到10倍濃縮，兩步富集可達(dá)到 30 倍濃縮。

適用于從人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞（CBMC）或外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）中富集 CD34+ 細(xì)胞。

操作說(shuō)明：

制備人CBMC或PBMC：通過(guò)Ficoll密度梯度離心法從人臍帶血或人外周血中分離出單個(gè)核細(xì)胞，收集后用PBS洗滌細(xì)胞，離心。離心結(jié)束后，棄去上清液，將CBMC或PBMC重懸于分選緩沖液中，并調(diào)整細(xì)胞濃度至1×10^8個(gè)細(xì)胞/mL。

注：分選緩沖液推薦配方：PBS，含有2 mM EDTA和2% FBS；或PBS，2 mM EDTA和0.5% BSA。緩沖液需預(yù)先經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾滅菌。

將100 μL的細(xì)胞懸液（含1×10^7個(gè)細(xì)胞）加入無(wú)菌流式管底部，再加入2 μL Biotin-Antibody Mix，混勻后在4°C下孵育10 min。

注：將細(xì)胞加入流式管底部時(shí)，避免沿管壁添加。若分選更多細(xì)胞，Biotin-Antibody Mix的用量需按比例增加。根據(jù)磁力架的不同，也可使用離心管進(jìn)行細(xì)胞分選。

磁珠預(yù)處理：渦旋振蕩重懸磁珠，將所需量的磁珠移至1.5 mL離心管中，加入1 mL分選緩沖液，10000 g離心1 min，棄去上清。重復(fù)以上洗滌步驟一次。加入與原體積相同的分選緩沖液重懸磁珠。若使用20 μL磁珠進(jìn)行清洗，則清洗后用20 μL分選緩沖液重懸。

細(xì)胞孵育結(jié)束后，在流式管中加入20 μL經(jīng)過(guò)預(yù)處理的Streptavidin Magnetic Beads，混合均勻，4°C下孵育10 min。

注：若分選的細(xì)胞數(shù)量較多，Streptavidin Magnetic Beads的用量需按比例增加。例如，分選5×10^7個(gè)細(xì)胞時(shí)，在500 μL細(xì)胞懸液中加入10 μL Biotin-Antibody Mix和100 μL Streptavidin Magnetic Beads。若分選的細(xì)胞少于1×10^7個(gè)，則應(yīng)將細(xì)胞懸液體積補(bǔ)至100 μL，并加入2 μL Biotin-Antibody Mix和20 μL Streptavidin Magnetic Beads。

孵育結(jié)束后，在流式管中加入2.5 mL分選緩沖液，用移液器輕輕吹打混勻5次，避免劇烈振蕩或上下顛倒混勻。

將裝有細(xì)胞的流式管置于磁力架上靜置5 min。

將含有純化CD34+細(xì)胞的細(xì)胞懸液輕輕倒入無(wú)菌離心管中，倒出過(guò)程中流式管保持在磁力架上。500 g離心5 min，棄去上清，收集細(xì)胞。

注：為進(jìn)一步提高CD34+細(xì)胞的富集效果，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要重復(fù)步驟2-7一次。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求洗滌細(xì)胞后，將其重懸于所需的緩沖液或培養(yǎng)基中，便可用于后續(xù)的分子生物學(xué)或細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

保存條件：4℃，2年。

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