D-熒光素鉀鹽是螢火蟲熒光素酶底物

D-熒光素（ D-Luciferin）是螢火蟲熒光素酶底物，其量子效率為 0.88，是魯米諾（Luminol）的 20 倍。D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶 （Luciferase）的常用底物，普遍應(yīng)用于整個生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是體內(nèi)活體成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在 ATP 和熒光素酶的作用下，熒光素（底 物）能夠被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過量時，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞 后，導(dǎo)入研究動物如大、小鼠體內(nèi)，之后注入熒光素，通過生物發(fā)光成像技術(shù)（BLI）來檢測光強(qiáng)度變化，從而實(shí)時監(jiān)測疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或藥物 的治療功效等。也可以利用 ATP 對此反應(yīng)體系的影響，根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來指示能量或生命體征。D-熒光素也常用于體外研究，包括 熒光素酶和 ATP 水平分析；報(bào)告基因分析；高通量測序和各種污染檢測。 

使用方法

1. 活體成像分析方法 

A：用 DPBS（w/o Mg2+、Ca2+）配置 D-Luciferin 工作液（15mg/mL），0.2 μm 濾膜 無菌過濾。立即使用，或 分裝-20℃保存。 

B：注射量：10μL/g 的體重，如 10g 重小鼠，注射 100μL 工作液（1.5mg D-Luciferin）。 

C：腹腔注射 10～15 分鐘后，上機(jī)進(jìn)行圖像分析。

 *建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力曲線，從而確定高信號檢測時間和信號平臺期。

2. 體外分析方法 A：用無菌水配置 200×的 D-Luciferin 儲備液（30mg/mL），立即使用，或分裝-20℃保存。 

B：用預(yù)熱好的*培養(yǎng)基稀釋 D-Luciferin 儲備液，配置工作液（150μg/mL）。 

C：去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基。 

D：進(jìn)行圖像分析前，向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液，37℃孵育 5-10 min，進(jìn)行圖像分析。