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文庫構(gòu)建流程：

1.       樣品QC

2.       從總RNA中分離mRNA（原始文庫將采用至少2 µg mRNA進(jìn)行構(gòu)建）

3.       以帶有NotI酶切位點的oligo（dT）Linker Primer為反轉(zhuǎn)錄引物，再在雙鏈cDNA片段的5’端加SalII adaptor

4.       NotI酶切、過柱去除小片段

5.       將合成的雙鏈cDNA與載體進(jìn)行連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH10B感受態(tài)細(xì)胞

6.       cDNA文庫的QC：檢測庫容量（重組子克隆數(shù)目）；隨機挑取30個克隆子進(jìn)行PCR鑒定和雙向測序分析，檢測含插入片段的克隆子比例，檢測平均插入片段大小

客戶提供

        注明樣品的種屬，收集樣品后，應(yīng)將樣品立即置于干冰保持低溫運輸。

我們提供

       含有文庫的甘油菌和質(zhì)量分析鑒定報告

質(zhì)量保證

      文庫含有至少4 x 10⁶個原始克隆

       樣品平均插入片斷保證大于1.0 kb

     有超過85%的載體含有插入片段