本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）原理，由包被有高純度的豬藍(lán)耳病毒抗原的微孔反應(yīng)板、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機(jī)理為包被抗原與樣本中的PRRSV-Ab結(jié)合，再與酶標(biāo)抗豬IgG抗體形成“包被抗原+PRRSV-Ab+酶標(biāo)抗豬IgG抗體”復(fù)合物，加入顯色劑，通過(guò)酶催化反應(yīng)顯色。顯色深淺與PRRSV-Ab的量成正比，當(dāng)樣本反應(yīng)顯色后，經(jīng)酶標(biāo)儀檢測(cè)所得結(jié)果超過(guò)設(shè)定的臨界值時(shí)結(jié)果判為陽(yáng)性，即表明免疫產(chǎn)生了抗體或有自然感染存在。

【主要組成成份】

1	PRRSV抗原包被板	96T×2
2	酶標(biāo)記物	22ml	黃色帽
3	樣本稀釋液	50ml	透明帽
4	PRRSV-IgG陰性對(duì)照血清	1.5ml	綠色帽
5	PRRSV-IgG陽(yáng)性對(duì)照血清	1.5ml	紅色帽
6	顯色劑	12ml×2	橙色帽
7	終止液	12ml	藍(lán)色帽
8	20X濃縮洗滌液	50ml	白色帽
9	蓋板膜	2張
10	說(shuō)明書	1份

【自備器材】

1．酶標(biāo)儀，雙波長(zhǎng)450/630nm濾光片

2．微量移液器（單道1-100ul、0.5-10ul、多道30-300ul）

3．水浴箱或恒溫箱

4．微量振蕩器

5．一次性槍頭（10ul，200ul）

6．去離子水

【樣本要求】

1．本試劑檢測(cè)的樣本為豬血清，樣本應(yīng)無(wú)菌采集，2℃～8℃貯存應(yīng)不超過(guò)一周，長(zhǎng)期應(yīng)在-20℃以下保存。

2．避免使用嚴(yán)重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長(zhǎng)菌及含疊氮鈉血清樣本。

【實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備】

1．試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實(shí)驗(yàn)前，先取出置室溫30min，可以獲得jia結(jié)果。.

2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋，稀釋的樣本混合均勻能取得較好結(jié)果。

3．配制洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍（例：將50ml洗滌液加入950ml去離子水中）。若20倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶，屬正?，F(xiàn)象，放置37℃至溶解后即可。

【檢驗(yàn)方法】

1．加樣：根據(jù)樣本數(shù)量，取所需板條，檢測(cè)時(shí)，設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照各2孔，分別加入不用稀釋的陰、陽(yáng)性對(duì)照血清100μl于相應(yīng)孔中（可不設(shè)空白對(duì)照）。其余為樣本孔，每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本（可做單孔也可雙孔檢驗(yàn)）。

2．溫育：加樣后，蓋上蓋板膜，置37℃溫育30分鐘。

3．洗板：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿反應(yīng)板孔，靜置10s左右，直接甩出，洗滌3次，后一次洗滌后拍干板內(nèi)液體。

4．加酶：每孔加酶標(biāo)記物100μl。

5．溫育：加好酶標(biāo)記物后蓋上蓋板膜，置37℃溫育30分鐘。

6．洗板：同步驟3。

7．顯色：每孔加顯色劑100μl，振蕩混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘。

8．終止：每孔加終止液50μl，振蕩10秒，充分混勻，終止后即讀數(shù)。

9．讀數(shù)：以450nm/ 630nm雙波長(zhǎng)檢測(cè)，讀取各孔吸光度值（OD值）。

【結(jié)果判定】

在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔的OD值。檢測(cè)結(jié)果有效的條件是陽(yáng)性對(duì)照孔的平均OD值≥0.6，陰性對(duì)照孔的平均OD值必須＜0.15；樣品中抗體存在與否，或樣本中抗體的相對(duì)水平的高低由S/P值決定，S/P值計(jì)算時(shí)按以下方式處理:

S/P=(樣本OD_450/630值-NCx(—))/（PCx(—)-NCx(—))，其中NCx(—)表示陰性對(duì)照孔平均OD_450/630值，PCx(—)表示陽(yáng)性對(duì)照孔平均OD_450/630值；