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ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果OD值為何偏低?
閱讀:632 發(fā)布時(shí)間:2023-3-6ELISA實(shí)驗(yàn)是一個(gè)非常嚴(yán)謹(jǐn)、極其考驗(yàn)操作者技巧和經(jīng)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn),檢測(cè)結(jié)果數(shù)值低、標(biāo)準(zhǔn)曲線梯度差、背景值高、變異系數(shù)大等諸多問題也是兵家常事。有很多客戶向我們咨詢,ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)總是偏低,不知道是什么問題。恒遠(yuǎn)生物就為大家總結(jié)一下具體原因,一起來看看吧!
一、整體OD值偏低或無信號(hào):
1.試劑盒組分失活
相應(yīng)對(duì)策:使用新的試劑盒,按照說明書要求保存試劑盒
2.試劑盒組分未平衡
相應(yīng)對(duì)策:試劑盒每個(gè)組分都需要平衡至室溫后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)
3.試劑混用或混合不充分
相應(yīng)對(duì)策:保證使用試劑盒內(nèi)完整一套試劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn),保證溶液充分混合
4.洗液被污染
相應(yīng)對(duì)策:配制新的洗液
5.洗滌液浸泡時(shí)間過久或洗板次數(shù)過多
相應(yīng)對(duì)策:按照說明書的要求進(jìn)行操作
6.孵育時(shí)間不充分
相應(yīng)對(duì)策:保證充足的孵育時(shí)間
7.孵育溫度不穩(wěn)定
相應(yīng)對(duì)策:檢查恒溫箱,確保孵育溫度穩(wěn)定
8.生物su化抗體或HRP酶結(jié)合物不足
相應(yīng)對(duì)策:保證濃縮液取量準(zhǔn)確且稀釋完
9.生物su化抗體或酶結(jié)合物稀釋不正確或步驟顛倒
相應(yīng)對(duì)策:按照說明書的步驟和要求進(jìn)行操作
10. 未加終止液
相應(yīng)對(duì)策:反應(yīng)結(jié)束時(shí),確保每孔加入終止液終止反應(yīng)
11.終止后未及時(shí)讀板
相應(yīng)對(duì)策:終止液終止反應(yīng)后需要在10min內(nèi)進(jìn)行讀板操作
12.酶標(biāo)儀設(shè)置錯(cuò)誤
相應(yīng)對(duì)策:在酶標(biāo)儀上檢查波長(zhǎng)和濾光片設(shè)置
二、標(biāo)曲線性佳但樣本OD值偏低
1.標(biāo)準(zhǔn)品部分降解
相應(yīng)對(duì)策:按照說明書推薦方式保存標(biāo)準(zhǔn)品。開封后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)以高濃度用EP管分裝凍存,保存于-20℃,半個(gè)月內(nèi)使用有效。
2.標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶不當(dāng)
相應(yīng)對(duì)策:打開前將標(biāo)準(zhǔn)品短暫離心,檢查復(fù)溶后是否有未溶解的物質(zhì)
3.標(biāo)準(zhǔn)品稀釋不正確
相應(yīng)對(duì)策:按照說明書要求,保證按正確倍比梯度稀釋
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