土壤酸性轉(zhuǎn)化酶 (S-AI) 活性檢測(cè)試劑盒

可見分光光度法

注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

規(guī)格：50T/24S

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 25mL 試劑一充分溶解備用；用不完的試劑 4℃保存； 試劑三：液體 20mL×1 瓶，4℃保存。

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 支，4℃保存，10mg 無(wú)水葡萄糖。臨用前加入 1mL 試劑一溶解,制備 10mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液備用。

產(chǎn)品說(shuō)明：

S-AI 在 pH 為 4.5~5.0  (酸性) 條件下催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗 糖代謝關(guān)鍵酶之一。

S-AI 催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖，進(jìn)一步與 3,5－二硝基水楊酸反應(yīng)，生成棕紅色氨基化合物， 在 540nm 有特征光吸收，在一定范圍內(nèi) 540nm 光吸收增加速率與 AI 活性成正比。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：

可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水、甲苯。

操作步驟：

一、樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或 37℃烘箱風(fēng)干，過(guò) 30~50  目篩。

二、測(cè)定步驟及加樣表：

1 、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min ，波長(zhǎng)調(diào)至 540nm ，蒸餾水調(diào)零。

2 、標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋：將 10mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液用試劑一稀釋至 4 、3 、2 、1 、0.8 、0.6 mg/mL 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

3 、加樣表：

混勻，煮沸 10min 左右 (蓋緊，以防止水分流失) ，流水冷卻后充分混勻，540nm 處蒸餾水調(diào)

零，記錄各管吸光值A ，記為 A 測(cè)定管、A 對(duì)照管、A 標(biāo)準(zhǔn)管、A 空白管。計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照 管，ΔA 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管。

三、S-AI 活性計(jì)算：

1 、  標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

以葡萄糖濃度為 x 軸，相應(yīng)的ΔA 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b；將ΔA 帶 入公式得到 x  ( mg/mL)

2 、  S-AI 活性計(jì)算

單位定義：37℃每 g 土壤每天產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。

S-AI  (U/g) =x×V 酶促÷W÷T

V 酶促：酶促反應(yīng)總體積，0.820mL；W：樣本鮮重，g；T：反應(yīng)時(shí)間：1/24d；

注意事項(xiàng)：

1 、如果加入試劑三，煮沸 10min 后有混濁物出現(xiàn)，建議離心除去沉淀 (10000rpm ，2min ) ，取上 清測(cè)定吸光度；

2 、如果吸光值大于 1 ，可以將上清液再進(jìn)行稀釋；若吸光值較小，可以減少上清液稀釋倍數(shù)。兩種 操作均要注意改變公式中的稀釋倍數(shù)。

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