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上海研謹(jǐn)生物科技有限公司資料大小
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198次規(guī)格:100管/48樣
土壤淀粉酶(Soil Amylase,S-AL)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
注意:正式測(cè)定之前選擇2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
產(chǎn)品內(nèi)容:
試劑一:液體8mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體3mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體10mL×1瓶,4℃保存。
產(chǎn)品說(shuō)明:
淀粉酶(EC3.2.1.1)是催化淀粉水解的一類酶的總稱。土壤中的淀粉酶主要來(lái)自于微生物,是一種重要的酶制劑,廣泛應(yīng)用于糧食加工、食品、釀造、發(fā)酵、紡織品工業(yè)和醫(yī)藥行業(yè)。
淀粉酶水解淀粉產(chǎn)生還原糖,可與3,5-二硝基水楊酸反應(yīng)生成紅棕色物質(zhì),在508nm處有特征吸收峰,顏色深淺在一定范圍內(nèi)與還原糖量成正比。
需自備的儀器和用品:
天平、水浴鍋、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、甲苯。
測(cè)定操作表:
對(duì)照管 | 測(cè)定管 | |
土樣(g) | 0.02 | 0.02 |
甲苯(μL) | 10 | 10 |
25℃靜置15min | ||
試劑一(μL) | 110 | 50 |
試劑二(μL) | 60 | |
充分混勻,37℃震蕩培養(yǎng)1h,8000rpm,25℃,離心10min | ||
上清液(μL) | 100 | 100 |
試劑三(μL) | 100 | 100 |
充分混勻,90℃水浴5min,待冷卻后,于微量石英比色皿/96孔板中測(cè)定508nm吸光值,分別記為A對(duì)照管和A測(cè)定管,△A=A測(cè)定管-A對(duì)照管。 |
計(jì)算公式:
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.2525x - 0.034,R2 = 0.9917
酶活單位定義:每g土樣每天催化生成1mg還原糖為一個(gè)酶活力單位。
S-AL(mg/d /g)=(△A +0.034)÷ 0.2525×V反總÷W÷T
= 10.464×(△A +0.034)÷W
V反總:反應(yīng)體系總體積,0.11mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1/24d;W:樣本質(zhì)量,g。
b. 用96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.1263x - 0.034,R2 = 0.9917
酶活單位定義:每g土樣每天催化生成1mg還原糖為一個(gè)酶活力單位。
S-AL(mg/d/g)=(△A +0.034)÷ 0.1263×V反總÷W÷T
=20.928×(△A +0.034)÷W
V反總:反應(yīng)體系總體積,0.11mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1/24d; W:樣本質(zhì)量,g。
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