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65次可見分光光度法
植物總酚(TP)含量檢測試劑盒說明書 貨號:YJS2309
規(guī)格:50T/24S
產(chǎn)品內(nèi)容:
提取液:60%乙醇, 自備。
試劑一:液體 20mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:液體 25mL×1 瓶,4℃保存。
標準品:液體 1mL×1 支,4℃保存。1mg/mL 單寧酸標準溶液。
產(chǎn)品說明:
植物酚類物質(zhì)具有清除自由基,抗氧化抗衰老的作用,具有較高的營養(yǎng)價值和醫(yī)療保健作用而 廣泛應(yīng)用于化妝品、食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域。
在堿性條件下,酚類物質(zhì)將鎢鉬酸還原,產(chǎn)生藍色化合物,在 760nm 處有特征吸收峰,測 760nm 處的
吸光值,即可得樣品總酚含量。
自備實驗用品及儀器:
天平、烘箱、粉碎儀、篩子、超聲破碎儀、60%乙醇、離心機、可見分光光度計、1 mL 玻璃比 色皿、蒸餾水。
操作步驟:
一、總酚提取
將樣本烘干至恒重,粉碎,過 40 目篩之后,稱取約 0. 1g ,加入 2.5mL 提取液,用超聲提取法進 行提取,超聲功率 300W ,破碎 5s ,間歇 8s ,60℃ , 提取 30min 。12000rpm ,25℃ , 離心 10min , 取上清,用提取液定容至 2.5mL ,待測。
二、標準品制備:
將 1mg/mL 單寧酸標準溶液二倍稀釋至 0.3125、0.1562、0.0781、0.0391、0.0195、0.0098、0.0049、 0.0024 、0.0012 、0.0006mg/mL ,待測。
三、測定操作表
1 、分光光度計預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 760nm ,蒸餾水調(diào)零。
2 、操作表
對照管 | 測定管 | 標準管 | 空白管 | |
樣本待測液 ( μL) | 50 | 50 | - | |
標準液 ( μL) | 50 | |||
蒸餾水 ( μL) | 50 | |||
試劑一 ( μL) | - | 250 | 250 | 250 |
混勻,室溫靜置 2min | ||||
試劑二 ( μL) | 250 | 250 | 250 | 250 |
蒸餾水 ( μL) | 700 | 450 | 450 | 450 |
混勻,室溫靜置 10 min, 1mL 比色皿,測定 760nm 吸光值。 |
空白管只測一次。
四、總酚含量計算
1 、標準曲線繪制:
以不同濃度的單寧酸為 x 軸,ΔA(A 標準-A 空白)為 y 軸繪制標準曲線 y= kx+b。
2 、植物總酚含量計算:
將ΔA=A 測定-A 對照帶入標準曲線,求 x(mg/mL)。
(1) 按樣本鮮重計算
總酚含量(mg/g 鮮重)= x×V 提取÷W= 2.5x÷W (2) 按樣本
蛋白濃度計算
總酚含量(mg/mg prot)= x×V 提取÷(V 提取×Cpr)= x ÷Cpr
V 提取:提取液體積,2.5 mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量,g。
注意事項:
(1)OD 值大于 1.0 ,樣品適當(dāng)稀釋再測定,注意計算公式里乘以稀釋倍數(shù)。
(2)試劑一對皮膚有一定的刺激性,請操作時做好防護措施。
本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用!請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途!
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