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技術文章

各種轉染辦法比擬

閱讀:140          發(fā)布時間:2016-8-24

ELISA試劑盒細胞倡議用CSCL梯度離心,轉染是拷貝數(shù)較多 GIBCO BRL ,Promega 陽離子脂質(zhì)體法 帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團構成復合物,然后脂質(zhì)體上剩余的電核與細胞膜上的唾液酸殘基的負電核分離;另一種解釋是經(jīng)過細胞是內(nèi)吞作用而被進入細胞。(若DNA濃渡過高,中和脂質(zhì)體外表電核,而降低了與細胞的分離才能) 穩(wěn)定轉染,瞬時轉染,一切細胞 運用辦法簡單,可攜帶大片段DNA,通用于各品種型的暴露DNA或RNA,能轉染各品種型的細胞,沒有免疫原性。

雖在體外基因轉染中有很高的效率,但在體內(nèi),能被血清肅清,并在肺組織內(nèi)累積,誘發(fā)激烈的抗炎反響,招致高程度的毒性,這在很大水平上限制了其應用 陽離子聚合物 帶正電的聚合物與核酸帶負電的磷酸基團構成帶正電的復合物后與細胞外表帶負電的蛋白多糖互相作用,并經(jīng)過內(nèi)吞作用進入細胞。 穩(wěn)定轉染,瞬時轉染,一切細胞 除了具有陽離子脂質(zhì)體的轉染效率高,操作簡單,適用范圍廣,反復性好等特性外,還具有在體內(nèi),轉染效率高,細胞毒性低等特性,是新一代的轉染試劑。

病毒介導法 逆轉錄病毒(RNA) 經(jīng)過病毒中膜糖蛋白和宿主細胞外表的受體互相作用而進入宿主細胞,之后反轉入酶啟動合成DNA并隨機整合到宿主基因組中 穩(wěn)定轉染,特定宿主細胞 可用于難轉染的細胞、原代細胞,體內(nèi)細胞等,但攜帶基因不能太大(<8kb),細胞需處團結期,需思索平安要素 中國科學院典型培育物保藏委員會 腺病毒(雙鏈DNA) 先和細胞外表的受體分離,繼而在αv整合素介導下被細胞內(nèi)吞 瞬時轉染,特定宿主細胞 可用于難轉染的細胞,需思索平安要素 中國科學院典型培育物保藏委員會 Biolistic 顆粒傳送法 (基因槍粒子轟擊法) 將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀,再將包被好的顆粒用彈道安裝投射入細胞。ELISA試劑盒

DNA在胞內(nèi)逐漸釋放,表達 瞬時性轉染,穩(wěn)定轉染 可用于:人的表皮細胞,纖維原細胞,淋巴細胞系以及原代細胞 . 顯微注射法 用顯微操作將DNA直接注入靶細胞核 穩(wěn)定轉染,瞬時轉染 轉染細胞數(shù)有限,多用于工程改造或轉基因動物的胚胎細胞 . 電穿孔法 高脈沖電壓毀壞細胞膜電位,DNA經(jīng)過膜上構成的小孔導入 穩(wěn)定轉染,瞬時轉染,一切細胞 適用性廣,除了質(zhì)粒外,還可轉染大的基因組(>65kb)但細胞致死率高,DNA和細胞用量大, 需依據(jù)不同細胞類型優(yōu)化電穿孔實驗條件,拷貝數(shù)較少1-20 .

AATK    AATK細胞凋亡關聯(lián)酪氨酸激酶抗體
ABCB5    ATP結合蛋白家族5抗體
APNG    N-甲基嘌呤DNA糖基化酶
AU5 tag    AU5 tag標簽抗體
ATP2c1    鈣離子ATP酶通道蛋白抗體
alpha-L-arabinofuranosidase    果桃α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗體
Apelin    脂肪炎癥因子Apelin抗體

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