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大鼠ELISA試劑盒檢測(cè)系統(tǒng)可謂是免疫學(xué)反應(yīng)應(yīng)用到科研中zui為靈敏的技術(shù)手段。可是在新老手操作過程中總是會(huì)出現(xiàn)或大或小的問題。本公司總結(jié)7步ELISA檢測(cè)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，做好這7步您就能得出的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
1、包被原的性質(zhì)很重要，蛋白濃度，是否降解，這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識(shí)別，所以保存抗原很重要，我做重組蛋白時(shí)，都嚴(yán)格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個(gè)道理。還有有的包被原可能不是蛋白，對(duì)于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對(duì)其改造再加以包被
2、包被液的選擇，一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時(shí)由于試驗(yàn)的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。應(yīng)注意以下原理：由于蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用，這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。具體的試驗(yàn)還要有堅(jiān)固的理論外也要實(shí)踐，看一下zui終可不可以應(yīng)用到自己試驗(yàn)當(dāng)中去。
3、封閉：繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程。封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙，從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。常用封閉劑有：0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉，比較價(jià)廉，可以高濃度使用(5%-10%);還有一些稀有用到的各種動(dòng)物血清(主要為了排除相似蛋白干擾)和酪蛋白等等。但zui終選用什么，要依據(jù)試驗(yàn)具體來實(shí)踐。
4、洗滌板：可以說在ELISA操作中，洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù)。因?yàn)榫郾揭蚁┑人芰蠈?duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，為達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的，清除殘留在板孔中游離的物質(zhì)，以及非特異性地吸附的干擾物質(zhì)，在洗滌時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。所以在洗板時(shí)會(huì)有一定誤差，人為因素很大(當(dāng)然有條件的用洗板機(jī)除外)，洗的不*或串了孔，對(duì)如此靈敏的ELISA系統(tǒng)可是不小的影響。大鼠ELISA試劑盒
5、加抗體標(biāo)本(和二抗):注意該換槍頭時(shí)換槍頭。標(biāo)本稀釋一般可用PBS稀釋，也可用封閉液去稀釋。如需加二抗，還要注意二抗的工作濃度，太高浪費(fèi)，太低則著色淺。
6、顯色：顯色系統(tǒng)又很多，我們一開始做的時(shí)候，要選擇適宜的顯色系統(tǒng)。注意顯色系統(tǒng)酶活性底物的保存HRP結(jié)合物加硫柳泵，AP結(jié)合物可加疊氮鈉。
AGPHD1    氨基糖苷類磷酸結(jié)構(gòu)域蛋白抗體
ASGPR1    唾液酸糖蛋白受體1抗體
ARSF    芳香基硫酸酯酶F抗體
AKAP5    A激酶錨定蛋白5抗體
ATXN3L    小腦脊髓共濟(jì)失調(diào)蛋白3抗體
ASTE1    ASTE1蛋白抗體
phospho-APG4B    磷酸化自噬相關(guān)蛋白4B抗體
AFAP    微絲相關(guān)蛋白1抗體
ADORA1    腺苷A1A受體抗體
ARSB    芳基硫酸酯酶B抗體
ABAT    γ氨基丁酸轉(zhuǎn)氨酶抗體
A2BP1    共濟(jì)失調(diào)蛋白2結(jié)合蛋白1抗體
ADAM17    腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)換酶
ARNT2     芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白2抗體
ABH8    AlkB同源蛋白8抗體
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