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ELISA試劑盒專家的一項(xiàng)重要研究:蓖麻毒蛋白提取率的方法
閱讀:2126 發(fā)布時(shí)間:2016-12-23人ELISA試劑盒蓖麻毒蛋白已被廣泛用于"導(dǎo)向藥物"的制備(即免疫毒素),將蓖麻毒蛋白應(yīng)用于生物農(nóng)藥方向也已受到廣泛關(guān)注與研究,因此,蓖麻毒蛋白的提取純化具有重要意義,研究提高蓖麻毒蛋白提取率的方法,并用于大規(guī)模之中,是許多專家正在進(jìn)行的一項(xiàng)重要研究。
從蓖麻種子或蓖麻餅粕中提取蓖麻毒蛋白粗提液的方法主要有:乙酸溶液提取法;磷酸緩沖溶液提取法;硫酸銨沉淀法和透析法等。隨著基因技術(shù)的發(fā)展,利用基因克隆方法獲得Ricin亦有成功報(bào)道。
酸緩沖液提取:用磷酸緩沖液浸泡蓖麻餅處理樣品20 h后,用聚乙二醇吸水,經(jīng)5000r/min離心機(jī)離心15min,取上清液測定蓖麻毒蛋白含量。
硫酸銨沉淀和透析法:在濾液中分別加入固體硫酸銨70%飽和度,5000r/min離心20min,所得深沉物先對蒸餾水透析,再對pH 7.7的HCl-Tris緩沖液透析。透析后的樣品用相對分子質(zhì)量為6000的聚乙二醇覆1-2天,直至把樣品中的水分吸干得粗蓖麻毒蛋白。收集所得粗蓖麻毒蛋白,用紫外分光光度計(jì)測定蓖麻毒蛋白含量。利用蓖麻毒素和凝集素對D-半乳糖基結(jié)合的特性,采用瓊脂糖Sepharose 4B吸附,用半乳糖洗脫,再用纖維素離子交換柱層析或葡聚糖凝膠過濾可進(jìn)一步純化得到蓖麻毒素。高寶巖將適量去殼蓖麻籽和石油醚加入到食品粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎脫脂,過濾除去石油醚,所得脫脂蓖麻粉置于用醋酸調(diào)整pH=3.8的醋酸水溶液中浸取12h,所得上清液對蒸餾水透析24h,然后對pH=6.5磷酸緩沖溶液透析24h,透析液經(jīng)25000 r/min超速離心30min,上清液為蓖麻毒蛋白粗提液。然后將蓖麻毒蛋白進(jìn)行柱層析分離純化,毒蛋白粗提液經(jīng)瓊脂糖Sepharose 4B分離得到純品。鄭成等通過乙酸提取、硫酸銨沉淀、透析,制備蓖麻粗蛋白,用紫外可見分光光度計(jì)測定蓖麻毒蛋白的含量,還使用液相色譜進(jìn)行了分析,提取率較高,結(jié)果較滿意。
人ELISA試劑盒隨著基因工程技術(shù)的發(fā)展,已能利用基因克隆的方法制備Ricin。從蓖麻籽中提取信使核糖核酸(MRNA),建立CDNA文庫,通過克隆獲得Ricin。由于基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的性、較高的表達(dá)水平和完整的翻譯后加工過程,此系統(tǒng)適用于制備臨床治療用的Ricin。
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