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技術(shù)文章

人ELISA試劑盒制備人類染色體G顯帶標本方法

閱讀:607          發(fā)布時間:2017-2-20

人ELISA試劑盒人類染色體G顯帶標本制備:EDTA一胰蛋白酶法

1.取25ml生理鹽水和25ml0.02%的EDTA溶液倒入立式染色缸中混勻。
2.取2.5%的胰蛋白酶原液1ml加入到上液中混勻,并用5%NaHCO3調(diào)pH值至7左右。置水浴箱預(yù)溫至37℃。
3.將染色體標本片浸入胰蛋白酶一EDTA溶液中處理5~20秒,同時輕輕搖動玻片。
4.取出標本立即浸入生理鹽水中洗兩次。
5.浸入37℃的Giemsa染液中染色5~10分鐘。
6.細水沖洗后晾干、鏡檢。
胰蛋白酶法
1.將常規(guī)制備的人染色體玻片標本(未染色的白片)置70℃烤箱中處理2小時,然后轉(zhuǎn)入37℃培養(yǎng)箱中備用,一般在第3~7天進行顯帶。
2.取2.5%的胰蛋白酶原液2.5ml加生理鹽水至50ml,配成0.125%的工作液并用NaHCO3調(diào)pH值至7左3.將配好的胰蛋白酶工作液放入37℃水浴箱中預(yù)熱。
4.將玻片標本浸入胰蛋白酶中,不斷擺動使胰蛋白酶的作用均勻,處理1~2分鐘(的時間自行摸索)。
5.立即取出玻片,放入生理鹽水中漂洗兩次。
6.染色。將標本浸入37℃預(yù)溫的Giemsa染液(1:10的Giemsa原液和pH6.8的磷酸緩沖液)中染色10分鐘左右。
7.自來水沖洗(用細水小心沖洗)、晾干。
8.鏡檢顯帶效果。人ELISA試劑盒在低倍鏡下選擇分散良好的長度適中的分裂相轉(zhuǎn)換油鏡觀察,若染色體未出現(xiàn)帶紋,則為顯帶不足;若染色體邊緣發(fā)毛為顯帶過頭,此時應(yīng)根據(jù)具體情況增減胰蛋白酶處理時間重新處理一張標本。
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