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小鼠ELISA試劑盒常見樣本采集方法
閱讀:474 發(fā)布時間:2018-4-23小鼠ELISA試劑盒常見樣本采集方法:
血清:全血在室溫自然凝固30分鐘后,1000g離心30分鐘,小心收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
血漿:根據(jù)試劑盒要求選擇合適的抗凝劑,與全血混合 20 分鐘后,1000g離心30分鐘,小心收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
細胞培養(yǎng)上清:將細胞培養(yǎng)液300 g離心10分鐘去除沉淀物,,仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
所有標本收集完成后,應(yīng)及時分裝放在-20℃或-70℃條件下保存,避免反復(fù)凍融。如果在24 小時內(nèi)檢測,樣本可以存放在 2-8℃。在分析前,冷凍樣本應(yīng)該緩慢的恢復(fù)至室溫,輕柔地混勻。
注意事項:
(1)要注意避免出現(xiàn)嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類似過氧化物的活性,因此,在以 HRP 為標記酶的 ELISA 測定中,如血清標本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的 HRP 底物反應(yīng)顯色。
(2)樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染。一則細菌所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶會對用相應(yīng)酶標記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。
(3)血清樣本如果是以無菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長時間保存,應(yīng)在-70℃以下凍存。
(4)冰凍保存的血清樣本須注意避免反復(fù)凍融。樣本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機械剪切力會對樣本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,凍融樣本的混勻亦應(yīng)注意,不要進行劇烈振蕩,反復(fù)顛倒混勻即可。
(5)樣本保存中如出現(xiàn)細菌污染所致的混濁或絮狀物時,應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。
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