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血清應(yīng)用使用指南
閱讀:117 發(fā)布時(shí)間:2023-5-5細(xì)胞培養(yǎng)液中添加的血清有牛血清、馬血清、人血清等,其中牛血清是zui常用的血清,分為胎牛血清和新生小牛血清。胎牛血清是從母牛破腹取出的胎牛中分離出的血清,價(jià)格昂貴。新生小牛血清是從剛出生的尚未哺乳的小牛中分離出來的血清,如廠家能做到這一點(diǎn),新生小牛血清的質(zhì)量與胎牛血清的質(zhì)量相差不大。如小牛出生后已哺乳,從這種小牛中取出的血清中可能含有較多的生物活性物質(zhì),其質(zhì)量明顯不如前兩種。
血清的質(zhì)量,種類及使用的濃度都有可能影響細(xì)胞的生長,而不同批次的血清支持細(xì)胞生長的能力也不同,尤其是對克隆細(xì)胞的生長,某些批次血清可能含有毒性或抑制細(xì)胞生長的物質(zhì)。因此,在購買大量血清之前,必須對血清支持細(xì)胞生長能力進(jìn)行檢測,然后再大量購買質(zhì)量好的同一批號的血清,并注意以下幾點(diǎn):
1、需要長期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃ – 70℃ 低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過1 個(gè)月。由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。
2、一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾血清。
3、瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1 天。然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。
4、熱滅活是指56℃, 30 分鐘加熱已wan全解凍的血清。加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻。此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分(complement)滅活。除非必須,一般不建議作此熱處理,因?yàn)闊崽幚頃?huì)造成血清沉淀物顯著增多,而且還會(huì)影響血清的質(zhì)量。補(bǔ)體參與反應(yīng)有:細(xì)胞毒作用, 平滑肌細(xì)胞收縮, 肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺, 增強(qiáng)吞噬作用, 促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化。
5、切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會(huì)變得渾濁,同時(shí)血清中的有效成分會(huì)破會(huì)而影響血清質(zhì)量。
6、血清中的沉淀物絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量??捎秒x心3000rpm, 5 分鐘去除,也可不用處理。
顯微鏡下“小黑點(diǎn)":經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象“小黑點(diǎn)",常誤認(rèn)為血清受污染。一般情況下,此小黑點(diǎn)不會(huì)影響細(xì)胞生長,但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號的血清。