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細(xì)菌感染的診斷
閱讀：603 發(fā)布時(shí)間：2013-4-11細(xì)菌感染的診斷
細(xì)菌性疾病的診斷,除個(gè)別因有特殊臨床癥狀不需細(xì)菌學(xué)診斷外（如破傷風(fēng)引起的典型攣等）一般均需進(jìn)行細(xì)菌學(xué)診斷以明確病因。然而自標(biāo)本中分離到細(xì)菌并不一定意味該菌為疾病的病原，因此應(yīng)根據(jù)病人的臨床情況、采集標(biāo)本的部位、獲得的細(xì)菌種類進(jìn)行綜合分析。例如自腦脊液中分離出腦膜炎球菌與自鼻咽部可存在腦膜炎球菌的意義即有不同。因腦脊液正常應(yīng)無(wú)菌存在，而5～10%正常人的鼻咽部分可存在腦膜炎球菌，為健康帶菌者。又如自血培養(yǎng)中分離到表皮葡萄球菌則應(yīng)根據(jù)患者免疫狀態(tài)以及有無(wú)因采血時(shí)污染皮膚上存在的正常菌群進(jìn)行分析，或再次作血培養(yǎng)，作血漿凝固酶測(cè)定，以確定其病原性。分離到的細(xì)菌常需做藥物敏感試驗(yàn)，以供選用適當(dāng)?shù)乃幬铩Ｓ袝r(shí)尚需做毒力試驗(yàn)以確定該菌株的致病性。由于細(xì)菌及其代謝產(chǎn)物具有抗原性，細(xì)菌性感染還可通過(guò)檢測(cè)抗體進(jìn)行診斷。此外，近年來(lái)還發(fā)展起來(lái)通過(guò)檢測(cè)細(xì)菌的遺傳物質(zhì)對(duì)細(xì)菌的遺傳物質(zhì)對(duì)細(xì)菌進(jìn)行診斷的新方法—基因診斷方法。細(xì)菌可能過(guò)變異株制備活菌苗，也可殺死細(xì)菌保存其抗原性以制備死菌苗。產(chǎn)生外毒素菌制備的類毒素、抗毒素等均有特異性防治的應(yīng)用價(jià)值。
*節(jié) 細(xì)菌感染的診斷
一、檢測(cè)細(xì)菌或其抗原
（一）直接涂片顯微鏡檢查
自病人標(biāo)本直接涂片作染色鏡檢是簡(jiǎn)便而快速的方法之一。自一定部位采集標(biāo)本作直接檢查需考慮細(xì)菌的形態(tài)特征與可能存在的細(xì)菌數(shù)量。腦膜炎患者的腦脊液和瘀斑刺破涂片，常可顯示在細(xì)胞內(nèi)的革蘭氏陰性腎形雙球菌，有診斷價(jià)值。白喉患者咽部假膜涂片中可見(jiàn)典型的桿菌有時(shí)可有異染顆粒，也有參考診斷價(jià)值。結(jié)核患者痰直接或濃集后，涂片抗酸染色檢出結(jié)核桿菌有診斷價(jià)值。在少數(shù)情況下，也有利用免疫熒光或酶標(biāo)記抗體染色鏡檢方法進(jìn)行快速診斷，如糞例中的霍亂弧菌、痢疾桿菌等，可用這種技術(shù)檢出。
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大多數(shù)病菌的形態(tài)與染色并無(wú)特征，因此需用培養(yǎng)方法來(lái)分離與鑒定細(xì)菌。雖然這一方法需要的時(shí)間較長(zhǎng)，但比較可靠。此外，只有通過(guò)這一方法才能獲得細(xì)菌的純培養(yǎng)，可用于做藥敏試驗(yàn)或毒力試驗(yàn)。應(yīng)根據(jù)不同細(xì)菌需要的營(yíng)養(yǎng)、生長(zhǎng)條件（如厭氧或CO2）、菌落生長(zhǎng)特征來(lái)初步識(shí)別細(xì)菌。如溶血性鏈球菌需在血瓊脂平板上生長(zhǎng)，菌落小而透明，菌落周圍有*溶血圈，可資鑒別。多數(shù)細(xì)菌欲確定為何種病原菌尚需進(jìn)一步獲得純培養(yǎng)及接種各種特殊培養(yǎng)基進(jìn)行生化反應(yīng)試驗(yàn)或確定其抗原性與致病力等。
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細(xì)菌的合成與分解代謝過(guò)程中，能通過(guò)酶利用一些物質(zhì)或分解一些物質(zhì)。不同的細(xì)菌具有不同的酶，因此各種細(xì)菌能夠利用與分解的物質(zhì)也各不相同。利用各種細(xì)菌的不同生化反應(yīng)幫助鑒別細(xì)菌在某些細(xì)菌如腸道桿菌中是很重要的步驟。例如腸道桿菌均為革蘭氏陰性桿菌。菌落形態(tài)亦相似，但對(duì)于糖的發(fā)酵結(jié)果不同，因此可利用不同種糖作為培養(yǎng)基質(zhì)進(jìn)行生化反應(yīng)予以區(qū)別。
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有些細(xì)菌即使用生化反應(yīng)變難區(qū)別，但其細(xì)菌抗原成份（包括菌體抗原、鞭毛抗原）卻不同。利用已知的特異抗體測(cè)定有無(wú)相應(yīng)的細(xì)菌抗原可以確定菌種或菌型。常用的方法為玻片凝集反應(yīng)，用已知的特異免疫血清與待鑒定的細(xì)菌在玻片上做凝集反應(yīng)，如出現(xiàn)凝集菌團(tuán)則為陽(yáng)性，說(shuō)明該菌有相應(yīng)的特異抗原。近年采用了各種檢測(cè)抗原的敏感方法，如對(duì)流免疫電泳、放射免疫、酶免疫、氣相色譜等方法，試圖直接從患者標(biāo)本中檢測(cè)細(xì)菌抗原作快速診斷。如果在細(xì)菌性腦膜炎中，利用對(duì)流免疫電泳在腦脊液中可分別檢測(cè)肺炎球菌、腦膜炎球菌及流感桿菌，特異性高，敏感性亦高。氣相色譜方法系列利用細(xì)菌代謝產(chǎn)生的揮發(fā)性短鏈有機(jī)酸，進(jìn)行氣相色譜分析可鑒別細(xì)菌，這在厭氧菌中應(yīng)用很廣。檢測(cè)抗原的另一優(yōu)點(diǎn)為在應(yīng)用了抗生素治療后，細(xì)菌生長(zhǎng)被抑制，利用培養(yǎng)方法不能檢出的細(xì)菌，因尚有抗原存在，在短期內(nèi)仍可被檢出，從而有助于明確病因。個(gè)別情況下還可利用噬菌體對(duì)細(xì)菌抗原型別分析，用于流行病學(xué)追蹤調(diào)查。
二、檢測(cè)抗體
人體受病菌感染后，經(jīng)一定時(shí)間產(chǎn)生抗體，抗體的量隨病菌感染過(guò)程而增多，表現(xiàn)為效價(jià)升高。因此用已知的細(xì)菌或抗原檢測(cè)患者體液（主要為血清）中有無(wú)相應(yīng)抗體及抗體量的動(dòng)態(tài)變化，可輻助診斷。一般采用血清進(jìn)行試驗(yàn)，故又稱為血清學(xué)試驗(yàn)。血清學(xué)試驗(yàn)適用于抗原性較強(qiáng)的病原菌及病程較長(zhǎng)的傳染病診斷。
細(xì)菌感染的診斷正常人如已經(jīng)受過(guò)某些病原菌隱性感染或近期進(jìn)行過(guò)預(yù)防接種，血清中可能含有對(duì)該種病原菌的一定量的抗體，因此必須有抗體效價(jià)升高或隨病程遞增才有參考價(jià)值。例如傷寒患者血清抗體的檢查稱為肥達(dá)氏試驗(yàn)（Widal test，即將患者血清不同稀釋后，與傷寒、副傷寒菌抗原在試管中做凝集反應(yīng)。根據(jù)zui高血清稀釋度仍有明顯凝集的血清抗體效價(jià)，結(jié)合患者具體情況作為診斷。多數(shù)血清學(xué)試驗(yàn)的診斷需取患者雙份血清，即一份在疾病的急性期，另一份在恢復(fù)期（一般為2～6周后），當(dāng)抗體效價(jià)升高4倍以上方有診斷價(jià)值。因此血清學(xué)診斷主要為病后的回顧性診斷。但目前有利用檢測(cè)某些細(xì)菌某些細(xì)菌特lgM抗體的早期診斷方法。此外，在檢測(cè)測(cè)抗體時(shí)至少應(yīng)有懷疑可能致病細(xì)菌的線索方可采用相應(yīng)抗原，否則就無(wú)從選擇做何種血清學(xué)試驗(yàn)。有些患者因早期使用抗生素治療，細(xì)菌在體內(nèi)繁殖不多，患者可不產(chǎn)生抗體，因而并非每一患者均有抗體效價(jià)升高的表現(xiàn)。然而當(dāng)病原菌未能被檢出時(shí)，有些患者仍可通過(guò)血清抗本效價(jià)的升高予以診斷，因此檢測(cè)細(xì)菌是互相輔助的診斷方法。
三、檢測(cè)細(xì)菌遺傳物質(zhì)
通過(guò)檢測(cè)病原體遺傳物質(zhì)來(lái)確認(rèn)病原體也許是檢查病原體為直接的方法了。目前比較成熟的技術(shù)包括基因探針技術(shù)和PCR技術(shù)。
?。ㄒ唬┗蛱结樇夹g(shù)
用標(biāo)記物標(biāo)記細(xì)菌染色體或質(zhì)粒DNA上的特異性片段制備成細(xì)菌探針，待檢標(biāo)本經(jīng)過(guò)短時(shí)間培養(yǎng)后，經(jīng)過(guò)點(diǎn)膜、裂解變性、預(yù)雜交和雜交后，利用探針上標(biāo)記物發(fā)出的信號(hào)可以知道雜交結(jié)果并判斷病原體的性質(zhì)?；蛱结樇夹g(shù)操作比較復(fù)雜，加之同位素污染等問(wèn)題，目前尚不能普及應(yīng)用。近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的地高辛標(biāo)記的非同位素探針，從探針標(biāo)記到雜交都很方便，只是價(jià)格昂貴，仍限于科研應(yīng)用，尚不能普及。
?。ǘ㏄CR技術(shù)
這是八十年代末發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)極有應(yīng)用價(jià)值的技術(shù)，設(shè)計(jì)病原體基因的特異引物，細(xì)菌標(biāo)本（不經(jīng)培養(yǎng)）經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單裂解、變性后，就可在PCR儀上進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，經(jīng)過(guò)25～30個(gè)循環(huán)，通過(guò)瓊脂糖電泳即可觀察擴(kuò)增結(jié)果，檢出病原體。這種技術(shù)的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速。它尤其適于那些培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)的病原菌的檢查，如結(jié)核桿菌、支原體等。PCR高度的敏感性使該技術(shù)在病原體診斷過(guò)程中極易出現(xiàn)假陽(yáng)性，避免污染是提高PCR診斷準(zhǔn)確性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。