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撫生試劑-PEG分子治療濃度對(duì)融合率有明顯影響
閱讀:404 發(fā)布時(shí)間:2014-4-14PEG分子治療濃度對(duì)融合率有明顯影響
PEG的分子質(zhì)量和濃度對(duì)融合率有明顯影響,相對(duì)分子質(zhì)量在400~6000,濃度在10%~60%均可促融。但相對(duì)分子質(zhì)量和濃度越大,促融率越高的同時(shí),黏度和對(duì)細(xì)胞的毒性也越大。常用濃度為40%~50%,低于30%融合率較低,高于50%則毒性較大。實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)表明,Merck公司的相對(duì)分子質(zhì)量為4000的PEG促融合效果。配制方法:取PEG 2g沸水中煮30min或高壓15min,冷卻至50~60℃時(shí)加入37℃預(yù)溫的不*培養(yǎng)液2ml,混勻后4℃保存。
2)融合的關(guān)鍵除了無(wú)菌操作之外就是動(dòng)作一定要輕柔,就像制備感受態(tài)細(xì)胞一樣,而且一定要混勻,不然在鏡下會(huì)出現(xiàn)成團(tuán)的細(xì)胞,會(huì)影響本就不高的融合率。
3)污染的處理。由于雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)周期長(zhǎng),工作量大,污染是zui需要引起高度重視的。當(dāng)遇到可疑污染的培養(yǎng)孔,先將孔中液體抽吸丟棄,加入lmol/L NaOH數(shù)滴沖洗兩次,再加入0.2ml NaOH并換上新消毒的培養(yǎng)皿蓋繼續(xù)培養(yǎng)。如板上出現(xiàn)多處污染,應(yīng)整板廢棄。