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酶聯(lián)免疫斑點(ELISPOT)

    酶聯(lián)免疫斑點 ( enzyme-linked immunosorbent spot, ELISPOT) 檢測技術(shù)是通過兩種高親和力的特異性抗細胞因子抗體來檢測淋巴細胞分泌細胞因子情況的一種方法。

    淋巴細胞在體內(nèi)被抗原激活后，或者在體外培養(yǎng)中被培養(yǎng)液中含有的特異性抗原或刺激劑激活后，將這些細胞轉(zhuǎn)入ELISPOT培養(yǎng)板中。這些活化的淋巴細胞所分泌的細胞因子，在孵育的過程中可在分泌細胞原位被ELISPOT培養(yǎng)板上包被的特異性細胞因子抗體所捕獲。

    將細胞和過量的細胞因子洗除后，加入生物素標記的檢測抗體，孵育后洗去多余檢測抗體。然后加入酶標記的鏈親和素（二抗），孵育后洗去多余酶標鏈親和素（二抗）。zui后加入酶的底物，作用后可形成不溶的顏色產(chǎn)物即斑點（SPOT）。每個斑點是激活的淋巴細胞分泌的細胞因子區(qū)域，代表一個活性淋巴細胞。

    實驗結(jié)果可在顯微鏡下觀察或使用酶聯(lián)免疫斑點自動圖象分析儀（BioReader 4000 Pro-X）來進行計數(shù)分析。該方法可在單細胞水平檢測淋巴細胞對特異性抗原的反應(yīng)能力及記數(shù)特異性抗原刺激下分泌性淋巴細胞產(chǎn)生的情況。

    ELISPOT比ELISA靈敏度高102～103倍。ELISPOT不僅能分析細胞因子分泌的總量變化，更能*檢測活化淋巴細胞的數(shù)量變化。ELISPOT可到檢測出一百萬個淋巴細胞中的一個活化細胞的細胞因子分泌。

    理論上講，所有能分泌細胞因子的細胞都可以用ELISPOT進行檢測分析。實際應(yīng)用中常見的檢測細胞類型包括：外周血淋巴細胞（PBMC）、骨髓、或者中樞神經(jīng)系統(tǒng)和淋巴組織的單細胞懸液。

    ELISPOT是一個嶄新的技術(shù)平臺，它適用于多種免疫學研究的分析。對于疫苗研究，中國藥品生物制品檢定所在《預防用DNA疫苗臨床前研究技術(shù)指導原則》及《預防用以病毒為載體的活疫苗制劑的技術(shù)指標原則》等規(guī)定中均指出，ELISPOT是檢測和評價疫苗的細胞免疫的有效方法。