技術(shù)文章
做ELISA標準曲線時需要重點注意的細節(jié)問題
閱讀:197 發(fā)布時間:2015-3-18用于免疫檢測的所謂“標準曲線"其實稱為擬合曲線比較合適。ELISA標準曲線做的好與壞會直接影響到實驗的結(jié)果,甚至是關(guān)系到實驗的成敗。在今天的文章中,上海撫生技術(shù)員為您總結(jié)出:做ELISA標準曲線時需要重點注意的細節(jié)問題,一起來看下。
1.設(shè)置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度,并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度,即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內(nèi),包括上限和下限。而對于呈S型的標準曲線,盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度zui陡段,即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。
2.檢測標準樣品時,應(yīng)按濃度遞增順序進行,以減少高濃度對低濃度的影響,提高準確性。
3.標準曲線的樣品數(shù)一般為7個點,但至少要保證有5個點。
4.做出的標準曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒炓蟛煌兴儎?,但一般來說,相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98,對于有些實驗,至少要0.99甚至是0.999。
5.樣品的濃度等指標是根據(jù)標準曲線計算出來的,所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事,否則后面的實驗結(jié)果無從談起。
6.采用倍比稀釋法配制標準曲線中的標準樣品濃度,這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的偏離。