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常用上皮組織及腫瘤標(biāo)記物
閱讀：1877 發(fā)布時(shí)間：2015-10-28角蛋白(Keratin)
elisa試劑盒角蛋白分為表皮角蛋白和細(xì)胞角蛋白兩種，這是根據(jù)其分部的部位而分的。表皮角蛋白包括皮膚表皮，消化道粘膜上皮、腺上皮甲狀腺濾泡上皮、氣管、支氣管上皮、肺泡上皮，角膜上皮、前列腺上皮等。細(xì)胞角蛋白包括頜下腺，胰腺，胸腺，細(xì)胞，肝細(xì)胞，腎小管細(xì)胞等。目前，應(yīng)用上述細(xì)胞中間絲角蛋白作為抗原所制備的抗體有單克隆抗體和多克隆抗體。角蛋白可有19個(gè)亞型 ，分為堿性和酸性，從1-8為堿性，9-19為酸性，分子量40-68不等，復(fù)層鱗上皮多為高分子量，單層上皮則多為低分子量，了解這些在臨床的鑒別診斷及抗體的應(yīng)用中都 有極大的幫助。目前，檢測這類特質(zhì)的抗體很多，根據(jù)不同的克隆出不周類型的抗體。常用的抗體有：
①單克隆小鼠抗人細(xì)胞角蛋白(Monoclonal mouse anti human cytokeratin)克隆為MNF116。
該抗體應(yīng)用范圍，各類的冰凍切片，涂片，細(xì)胞培養(yǎng)片和經(jīng)甲醛固定石蠟包埋的組織切片 。用本抗體檢測的陽性組織有：鱗狀上皮，甲狀腺濾泡上皮消化道上皮，胰腺膽管上皮，肝膽管上皮，角膜上皮等以及發(fā)生于上述來源的腫瘤。應(yīng)該注意的是有一些腫瘤在檢測時(shí)，可出現(xiàn)兩種陽性物，即用兩種抗體來檢測如采用CK和Vimentin，可出現(xiàn)雙向表達(dá)陽性的腫瘤有：癌內(nèi)瘤，子宮內(nèi)膜腺癌肺腺癌，上皮樣內(nèi)瘤，滑膜內(nèi)瘤，唾液腺肌上皮瘤，間皮瘤等等。這是由于在這些腫瘤中存在著兩種不同的中間絲的緣故。
應(yīng)用該抗體檢測呈陰性的腫瘤有：各種淋巴瘤，各類肌源性的腫瘤，惡性黑色素瘤，骨腫瘤，纖維組織腫瘤，脂肪腫瘤，神經(jīng)組織腫瘤和精原細(xì)胞瘤等。
在檢測某些腫瘤時(shí)，常可出現(xiàn)這樣的問題，在同一張切片上，同樣的鱗狀細(xì)胞癌的細(xì)胞，有的抗原表達(dá)為強(qiáng)陽性，有的表達(dá)為中度陽性性，有的表達(dá)為弱陽性，甚至有的呈陰性。這主要是由于各種細(xì)胞處于增生的不同階段，細(xì)胞分泌的抗原量不同，因而表達(dá) 也不同。
該抗體可用各種方法檢測，但用真空負(fù)壓LSAB法。產(chǎn)品說明書注明該抗體稀釋度1：50至1：100，我們使用為1：100。
②單克隆小鼠抗人細(xì)胞角蛋白，克隆為LP34。該抗體的使用范圍，檢測各種組織基本上與①號抗體相同，但效果不如①號。
③單克隆小鼠抗 人細(xì)胞角蛋白，克隆為35BH11。該抗體的特點(diǎn)是：A，可檢測幾乎所有的非鱗狀上皮包括卵巢腺癌，胃腸道腺癌，甲狀腺癌，肝癌， 子宮癌，腎癌等。B、不與鱗狀上皮起反應(yīng)。C、對膀胱癌，鼻咽癌，胸腺癌等部分陽性。但是，該 抗體只能用于冰凍切片 ，涂片和細(xì)胞培養(yǎng)片。不能用于石蠟切片 。
elisa試劑盒④單克隆小鼠抗 人細(xì)胞角蛋白，克隆34BE12。該 抗體屬于高分子量類型，它可檢測鱗狀上皮管上皮和 復(fù)層上皮的組織及其來源的腫瘤。
適用范圍：可用于各種類型的切片 。
2. 單克隆小鼠抗人上皮細(xì)胞膜抗原 (Monoclonal mose anti human epithelial memberance antigen,EMA)
上皮細(xì)胞膜抗原是上皮細(xì)胞表面大分子糖蛋白物質(zhì)，它不僅存在于各種上皮，以及各種上皮來源的腫瘤，也可存在于部分非上皮及其來源的腫瘤，如漿細(xì)胞，組織細(xì)胞等。
應(yīng)用EMA來檢測正常的組織時(shí)，其陽性表達(dá)主要在細(xì)胞膜上，但在檢測腫瘤時(shí)，這種陽性物不僅在細(xì)胞膜上出現(xiàn)，也可在細(xì)胞漿中見到。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞在分化增生時(shí)，陽性物表達(dá)強(qiáng)陽性。當(dāng)腫瘤細(xì)胞趨于成熟或已成熟時(shí)，陽性物表達(dá)較弱，腫瘤細(xì)胞未分化時(shí)，抗原表達(dá)呈陰性。
EMA在檢測上皮組織及其來源的腫瘤組織時(shí)，抗原表達(dá)陽性，在檢測非上皮來源的腫瘤如漿細(xì)胞瘤，滑膜內(nèi)瘤，上皮樣內(nèi)瘤，平滑肌內(nèi)瘤，神經(jīng)鞘瘤，及來惡性神經(jīng)鞘瘤時(shí)，抗原也可表達(dá)為部分陽性。因此認(rèn)為：EMA不是上皮性來源腫瘤所*的標(biāo)記物，它的特異性不高。
該 抗體適用范圍廣，適合于各種類型的切片，應(yīng)用真空負(fù)壓LSAB法檢測時(shí)，稀釋度在1：100。
3. 癌胚抗原(Carcinombryonic antigen ,CEA)
自1965年Go等從結(jié)腸癌分離出一種腫瘤的相關(guān)抗原后，經(jīng)過進(jìn)一步的研究后發(fā)現(xiàn)，它存在于胎兒的腸里，由于人們將其稱為癌胚抗原。在實(shí)際應(yīng)用中，CEA是一種廣譜的標(biāo)記物。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，它對胃癌，腸癌，肺癌，乳腺癌，胰腺癌，子宮頸癌，子宮體腺癌，卵巢癌，皮膚鱗狀細(xì)胞癌，膀胱移行上皮癌，食道癌等，抗原表達(dá)陽性，在上述的同類組織及癌旁類性組織，也可見到陽性物，有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，用CEA標(biāo)記滑膜內(nèi)瘤，間皮瘤，上皮樣內(nèi)瘤和腦膜瘤，也可表達(dá)陽性。
目前，CEA有兩種產(chǎn)品，一是單克隆抗體，另一是多克隆抗體。
① 單克隆小鼠抗 人CEA，克隆為A5B7。
該抗體的特點(diǎn)，純度高，雜質(zhì)含量少，很少引起非特異性染色，同時(shí)，也不與含糖蛋白的物質(zhì)起反應(yīng)，因此，背景清晰干凈。
該抗體可檢測上述的病種及其來源的組織，適用于各種切片的染色。稀釋度為1：100。
② 兔抗人CEA。該抗體為多克隆抗體，純度不如①號抗體，檢測及適應(yīng)與①號抗體相同，但效果不如①號抗體，且較容易產(chǎn)生背景。稀釋度在1：300。
4.山羊抗人甲胎蛋白(Goat anti human alphafeloprotein,AFP)
AFP主要由胎兒肝細(xì)胞和卵黃細(xì)胞產(chǎn)生的一種酸性糖蛋白少量由胎兒的胸腺、肺、胃、腸道的細(xì)胞產(chǎn)生。AFP也不是一種肝癌*的標(biāo)記物。初用時(shí)把AFP作為原發(fā)性肝癌的一項(xiàng)特異性診斷指標(biāo)。隨著免疫組化的深入開展和研究的深入進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明：AFP的升高不僅在原發(fā)性肝細(xì)胞癌的病例，在生殖細(xì)胞腫瘤卵黃瘤和睪丸胚胎癌的病例也可大量見到。
用AFP檢測后顯示陽性的病例有：原發(fā)性肝細(xì)胞癌，胃癌，卵黃 瘤和睪丸胚胎癌等。其陽性 表達(dá)部位主要在細(xì)胞漿，也有少量在細(xì)胞膜和細(xì)胞核上。
該抗體適合于各種切片的標(biāo)記，可用任何一種 免疫 方法來進(jìn)行染色，稀釋度為1：100-1：300。
elisa試劑盒上述四種類型的抗體可作為來源于上皮的腫瘤及其它來源的腫瘤的區(qū)別。只要損傷正確，抗體的質(zhì)量沒問題，就可獲得滿意的結(jié)果。使用時(shí)應(yīng)根據(jù)不同的組織，不同的形態(tài)結(jié)構(gòu)，來選擇合適的抗體。當(dāng)然有的腫瘤決不是用一兩種抗體就能夠把它們給予區(qū)分開來。因此，要根據(jù)不同的情況合理使用抗體，以便作出正確的診斷。