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ELISA試劑動植物樣品的采集及DNA樣品的提取
閱讀:330 發(fā)布時間:2016-3-28ELISA試劑盒1.動物樣品的采集及處理方法
遺傳學(xué)數(shù)據(jù)在野生動物和圈養(yǎng)動物的保護和管理中變得日益重要。在本文中,我們總結(jié)了一些能簡便而有效地獲得樣品及數(shù)據(jù)的方法。
我們在采集樣品之前,對將要進行的遺傳學(xué)分析有所了解。然而,采集者并非都是研究者,當(dāng)采集地與實驗室有相當(dāng)距離時,采集者常常要保存好樣品直到有合適的接受者或存放地,這就要求采集者應(yīng)具備一定的經(jīng)驗。
首先,所有樣品均應(yīng)以個體序號進行標(biāo)注,并且應(yīng)寫上種名、性別、采樣者姓名以及采集日期,越詳盡越好,以便同一個體的不同類數(shù)據(jù)可以相互引用,另外,地理來源的標(biāo)注也很重要,需要注明。對于野外捕獲的動物,有條件者在地圖上標(biāo)明捕獲地及其經(jīng)緯度。對圈養(yǎng)動物的每個野外捕獲種源都要有同樣的記錄和詳盡的譜系圖,因為譜系圖可用于計算近交系數(shù)。
總之,背景資料越詳細越好,即使不能得到這里所列的全部信息,也要盡可能詳盡。
l.1 樣品的測量方法
在一定數(shù)量的分類群中采用的標(biāo)準(zhǔn)測量方法可用于以下四個方面:
(1)分類學(xué)上:一套理想的測量方法應(yīng)能大致上重建機體每個主要硬件部分的形狀和大小。
(2)不對稱性分析:機體各部分的起伏不對稱,也許表明進化過程在一定程度上正在變得不穩(wěn)定,這可能是環(huán)境壓力或近交的結(jié)果。測量不對稱時機體左右兩部分均應(yīng)考慮在內(nèi)。
(3)遺傳變異:在科級水平上,如果對同一年齡的個體采用同樣的測量方法,就有可能對所選特征中的遺傳成分變異進行粗略的估計。雖然并非總是能做到這樣,但能使遺傳學(xué)家對所選特征(如生殖特征方面遺傳變異的任何丟失)進行監(jiān)視。
(4)生理檢測或記錄:采用標(biāo)準(zhǔn)測量方法得到的記錄,也許會有助于與用其他手段得到的數(shù)據(jù)起來分析。例如,如果有了精子形態(tài)的記錄,或是特殊寄生物的感染記錄,遺傳學(xué)家就能因此尋找在不同群體中這些因素與變異水平的相關(guān)性。
1.2 組織樣品的采集和保存
表7-1 列出了常用的組織在遺傳學(xué)研究中的用途。下面詳細給出針對不同研究目的的適當(dāng)方法。當(dāng)然,每個實驗室都有各自習(xí)慣的組織處理方法,因此,本文僅給出快速保存的有關(guān)要求,但對每種組織的可用性都有所評述,以便在用途有沖突時,能對潛在數(shù)據(jù)的可能應(yīng)用作出迅速判斷。注:表中數(shù)字代表正文中敘述的方法。數(shù)字“1”即代表正文7.1.2.1 中的方法,數(shù)字“2”即代表正文7.2.2中的方法。其余依此類推。
使用腫瘤、毛發(fā)及精子樣品,保存時應(yīng)特別注意。使用細胞培養(yǎng)樣品可減少對活體或新殺動物的依賴,如果培養(yǎng)物來源于腫瘤組織細胞,則可大量減少對同種動物組織的進一步需求。組織材料必須在數(shù)小時內(nèi)送到有關(guān)實驗室或用于其他的細胞培養(yǎng)。如果已經(jīng)知道DNA 序列的一小部分,就可利用PCR 技術(shù)從很少一部分組織中擴增DNA,從而使極其的樣品(如一根毛發(fā)或單個精子)具有更高的利用價值和更大的可信度。
組織必須取自活體動物或死后1~2 分鐘內(nèi)的動物,并且要快速保存起來,除非出現(xiàn)下述情況:在野外條件或是匆忙安排的活體取樣,因此沒有時間同實驗室。此時要有目的地擴大采集和儲存量。如果已經(jīng)詳細知道樣品的確切用途,則有時條件可以放寬。例如,對血液樣品來說,有些酶是不要求立即凍存的。
每一種組織的制備和保存方法均列在表7-1 中,表中同時列出了每種樣品的用途??焖賰龃鏁r樣品可放人液氮、干冰中或直接放入-70℃冰箱。凍存樣品可在—70℃液氮、冰箱、干冰或-20℃冰箱中保存和運輸。樣品凍存及運輸均以放入液氮中效果較好。非凍結(jié)冰箱是不能用的。