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     ELISA原理實驗條件和技術(shù)要點

    在應(yīng)用ELISA時，首先要清楚下面內(nèi)容：
    1，是檢測抗體還是抗原？
    2，檢測的結(jié)果是定性還是定量？
    3，是否需要檢測特異抗體的類型？
    4，所用抗體/單克隆抗體的親和力怎樣？
 
    （1）檢測抗原zui常用于檢測抗原的方法是非競爭性的雙抗體夾心法，其次是競爭法。但競爭法在具體實驗中有些困難，特別是檢測微生物的抗原，因為需要標記抗原，這對于某些抗原是很難做到的，甚至是不可能的。另外在競爭法中，酶標記的抗原與標本直接混合在一起，許多標本中含有酶抑制劑或蛋白A樣物質(zhì)，可影響ELISA的結(jié)果。
 
    （2）檢測抗體檢測抗體種類常用的方法是檢測抗體種類的捕獲法，這個方法常用于檢測特異性IgG、IgA和IgM.。這個方法的*步是捕獲所需要檢測的一個種類的抗體，接下來是檢測捕獲的抗體是否是特異性抗原的抗體。間接ELISA在檢測IgG時比較簡單，但不適用于檢測其他種類的抗體，因為血清中如果有特異IgG存在將與IgM或IgA等競爭結(jié)合抗原。
 
    競爭法檢測抗體有兩種方法：一種是將標記的抗體和標本同時加入反應(yīng)孔內(nèi)，但標記的抗體和標本中的抗體必須是結(jié)合抗原的不同決定簇；另一種是先加標本，沖洗后再加標記的抗體。競爭法檢測抗體比間接法容易判斷結(jié)果，并且比較敏感和特異。
 
    不論選擇哪種方法，ELISA都包括6個步驟：
    1，抗原或抗體吸附于固相；2.加標本和試劑；3，孵育和沖洗；4，加酶標抗原或抗體；5，加適當?shù)牡孜铮?，檢測和分析結(jié)果。
    雖然ELISA法在理論上十分簡單，但每一步都有要注意的事項。不論是新設(shè)計的ELISA還是沿用其他ELISA方法都有以下幾方面技術(shù)要點：固相載體的選擇和試劑的制備，反反應(yīng)條件和操作的標準化。

GMPPA    GDP甘露糖焦磷酸化酶抗體
GPR171    G蛋白偶聯(lián)受體171抗體
GPM6B    神經(jīng)細胞膜糖蛋白M6b
GUK1    鳥苷酸激酶GMK抗體
Galactocerebroside    半乳糖腦苷脂酶抗體
GRK5    G蛋白偶聯(lián)受體激酶5抗體
GTP binding protein REM1    GTP結(jié)合蛋白REM1抗體
phospho-GSK3 Alpha(Ser21)    磷酸化糖原合酶激酶-3α抗體
GDF7    生長分化因子7抗體

ELISA試劑盒