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CRISPR技術(shù)助力真核細胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究
閱讀：181 發(fā)布時間：2013-10-10| 提 供 商 | 上海撫生實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 14.2KB |
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CRISPR技術(shù)助力真核細胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究CRISPRs 全稱為規(guī)律成簇間隔短回文重復（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats），這是一類廣泛分布于細菌和古菌基因組中的重復結(jié)構(gòu)。CRISPR 與一系列相關(guān)蛋白、前導序列一起，能為原核生物提供對抗噬菌體等外源基因的獲得性免疫能力。
日前，加州大學舊金山分校，伯克利分校等機構(gòu)的科學家們指出 CRISPR 技術(shù)可以用于真核細胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究， CRISPR 干擾（CRISPRi）可以作為真核細胞基因表達調(diào)控的一種通用工具。
此前這一研究組發(fā)現(xiàn)當缺失核酸內(nèi)切酶活性的 Cas9 與一種導向 RNA 共表達時候，會產(chǎn)生一種 DNA 識別復合物，這種復合物能特異性干擾轉(zhuǎn)錄延伸， RNA 聚合酶結(jié)合，或轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合。研究人員將這個系統(tǒng)稱為 CRISPR 干擾（CRISPRi ），并指出這一系統(tǒng)能有效抑制大腸桿菌中靶向基因的表達，并且不會出現(xiàn)脫靶效應。而且利用 CRISPRi ，還可以同時抑制多個靶基因，這種作用也是可逆。
在這一基礎(chǔ)上，研究人員進一步發(fā)現(xiàn)在不同的調(diào)控功能元件的效應位點，加入 dCas9 ，能促進其穩(wěn)定和有效轉(zhuǎn)錄的抑制或激活，這一點在人類和酵母細胞中都得到了證實。
同時將 dCas9 耦合到轉(zhuǎn)錄抑制結(jié)構(gòu)域還能極大的增強多個內(nèi)源性基因的表達沉默。此外研究人員還利用 RNA -seq 分析表明， CRISPR 干擾（ CRISPRi ）介導的轉(zhuǎn)錄抑制特異性很高。
這些研究數(shù)據(jù)均表明，研究人員建立的 CRISPR 系統(tǒng)可以作為一個模塊化，靈活的 DNA 結(jié)合平臺，用于針對靶向 DNA 序列蛋白召集，這也表明 CRISPRi 可以作為真核細胞基因表達調(diào)控的一種通用工具。
此前，懷特海德生物醫(yī)學研究所的科學家在《細胞》（Cell）雜志上發(fā)表的一項研究成果將再次*改變遺傳工程動物模型的構(gòu)建方式，甚至有可能重新定義哪些物種可作為模式生物。這是*次利用這種稱作CRISPR/Cas的系統(tǒng)，在一個多細胞生物體內(nèi)改變多個基因。