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撫生試劑-大鼠Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)酶聯(lián)免疫分析
閱讀:120 發(fā)布時間:2014-4-10大鼠Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍:
0.8µg/L -24µg/L
使用目的:
96T
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中Ⅰ型前膠原 N 端前肽(PⅠNP)含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠Ⅰ型前膠原 N 端前肽(PⅠNP)水平。用純化
的大鼠Ⅰ型前膠原 N 端前肽(PⅠNP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中
依次加入Ⅰ型前膠原 N 端前肽(PⅠNP),再與 HRP 標(biāo)記的Ⅰ型前膠原 N 端前肽(PⅠNP)抗體
結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP
酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Ⅰ型前
膠原 N 端前肽(PⅠNP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)
準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠Ⅰ型前膠原 N 端前肽(PⅠNP)濃度。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液
2 酶標(biāo)試劑
3 酶標(biāo)包被板
4 樣品稀釋液
5 顯色劑 A 液
6 顯色劑 B 液
標(biāo)本要求
20ml×1 瓶
6ml×1 瓶
12 孔×8 條
6ml×1 瓶
6ml×1 瓶
6ml×1/瓶
7 終止液
8 標(biāo)準(zhǔn)品(48µg/L)
9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10 說明書
11 封板膜
12 密封袋
6ml×1 瓶
0.5ml×1 瓶
1.5ml×1 瓶
1 份
2 張
1 個
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能
馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
24µg/L
12µg/L
6µg/L
3µg/L
1.5µg/L
5 號標(biāo)準(zhǔn)品
4 號標(biāo)準(zhǔn)品
3 號標(biāo)準(zhǔn)品
2 號標(biāo)準(zhǔn)品
1 號標(biāo)準(zhǔn)品
150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150µl 的 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150µl 的 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150µl 的 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150µl 的 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,
然后再加待測樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復(fù) 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
操作程序總結(jié):
計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的
OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),
即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未
用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在 5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 個月
豬血管生成素2(ANG-2)免疫組化試劑盒 Human erythropoiesis stimulating factor,ESF 免疫組化試劑盒 96T/48T
豬血管生成素1(ANG-1)免疫組化試劑盒 Human TNF related activation induced cytokine,TRANCE 免疫組化試劑盒 96T/48T
豬血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)免疫組化試劑盒 Human growth hormone relasing factor,GH-RF 免疫組化試劑盒 96T/48T
豬血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體(VE-cad)免疫組化試劑盒 Human macrophage chemotatic factor,MCF 免疫組化試劑盒 96T/48T
豬血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)免疫組化試劑盒 Human Interferon α/βReceptor,IFN-α/βR 免疫組化試劑盒 96T/48T
豬心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)免疫組化試劑盒 Human B cell growth protein,BCGF 免疫組化試劑盒 96T/48T