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ELISA試劑盒要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中需用

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ELISA試劑盒要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中需用

    可用作ELISA試劑盒測定的標(biāo)本十分廣泛,體液(如血清 )、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標(biāo)本以測定其中某種抗體 或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測定(如血清 、尿液),有些則需經(jīng)預(yù)處理(如糞便和某些分泌物)。

    大部分ELISA試劑盒檢測均以血清為標(biāo)本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均同等于血清。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑,而血清標(biāo)本只要待血清自然凝固、血塊收縮后即可取得。除特殊情況外,在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中均以血清作為檢測標(biāo)本。在ELISA試劑盒中血漿和血清可同等應(yīng)用。一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃,ELISA試劑盒檢測試劑盒超過一周測定的需低溫冰存。凍結(jié)血清
    融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩?;鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測。反復(fù)凍融會(huì)使抗體 效價(jià)跌落,所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。保存血清自采集時(shí)就應(yīng)注意無菌操作,ELISA試劑盒也可加入適當(dāng)防腐劑(見3.2.4)。
    按試劑盒說明書的的試劑。ELISA試劑盒中用的蒸餾 水或去離子水,包括用于洗滌的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應(yīng)用pH計(jì)測量較正。從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。
    加標(biāo)本一般用微量加樣器,按規(guī)定的量加入板孔中。ELISA試劑盒每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴,以發(fā)生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定(如間接法ELISA試劑盒)需用稀的血清,可在試管 中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液,再在其加入血清標(biāo)本,然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物用液時(shí)可用定量多道加液器,使加液過程迅速完成。

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