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常染色體隱性遺傳性耳聾59蛋白ELISA試劑盒說明書
本試劑僅供研究使用  標本：體液

常染色體隱性遺傳性耳聾59蛋白ELISA試劑盒說明書試驗原理：
BFGF試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知BFGF濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將BFGF和生物素標記的抗體同時溫育。人堿性成纖維細胞生長因子ELISA 檢測試劑盒洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中BFGF的濃度呈比例關系。

常染色體隱性遺傳性耳聾59蛋白ELISA試劑盒說明書自備材料
1．蒸餾水。
2．加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3．振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
1．避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2．實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項
1．試劑應按標簽儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
2．實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
3．不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4．使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5．使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6．洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7．底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8．加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9．按照中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備
標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。

2．洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟
1．使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2．根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
3．加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
4．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5．每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7．每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8．取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結(jié)果。
9．在450nm波長處測定各孔的OD值。

局限
6號標準品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到的結(jié)果。

性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應。
3. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

結(jié)果判斷與分析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的BFGF標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的BFGF含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值范圍：0-800pg/ml

4、敏感度： 1.0 pg/ml

 PAI-1  兔子纖溶酶原激活物抑制因子1  規(guī)格： 48T/96T

 PAI  兔子纖溶酶原激活物抑制因子  規(guī)格： 48T/96T

 ICAM-3/CD50  兔子細胞間粘附分子3  規(guī)格： 48T/96T

 ICAM-2/CD102  兔子細胞間粘附分子2  規(guī)格： 48T/96T

 ICAM-1/CD54  兔子細胞間粘附分子1  規(guī)格： 48T/96T

 DPD  兔子脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉  規(guī)格： 48T/96T

 DHEA-S  兔子脫氫表雄酮硫酸酯  規(guī)格： 48T/96T

 HA  兔子透明質(zhì)酸  規(guī)格： 48T/96T

 MBP  兔子髓磷脂堿性蛋白  規(guī)格： 48T/96T

 RBP-4  兔子視黃醇結(jié)合蛋白4  規(guī)格： 48T/96T

 GHRP  兔子生長激素釋放多肽  規(guī)格： 48T/96T

 ADM  兔子腎上腺髓質(zhì)素  規(guī)格： 48T/96T

 NT-4  兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子4  規(guī)格： 48T/96T

 NT-3  兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子3  規(guī)格： 48T/96T

 NSE  兔子神經(jīng)特異性烯醇化酶  規(guī)格： 48T/96T

 NGF  兔子神經(jīng)生長因子  規(guī)格： 48T/96T

 GFAP  兔子神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白  規(guī)格： 48T/96T

 PGE2  兔子前列腺素E2  規(guī)格： 48T/96T

 PGE1  兔子前列腺素E1  規(guī)格： 48T/96T

 GIP  兔子葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽  規(guī)格： 48T/96T

 CORT  兔子皮質(zhì)酮/腎上腺酮  規(guī)格： 48T/96T

 Cortisol  兔子皮質(zhì)醇  規(guī)格： 48T/96T

 FⅡ  兔子凝血因子Ⅱ  規(guī)格： 48T/96T

 TR  兔子凝血酶受體  規(guī)格： 48T/96T

 BNP  兔子腦鈉素/腦鈉尿肽  規(guī)格： 48T/96T

 ES  兔子內(nèi)皮抑素  規(guī)格： 48T/96T

 eNOS-3  兔子內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3  規(guī)格： 48T/96T

 ET-1  兔子內(nèi)皮素1  規(guī)格： 48T/96T

 ET-1  兔子內(nèi)皮素1  規(guī)格： 48T/96T

 IgM  兔子免疫球蛋白M  規(guī)格： 48T/96T

 IgG  兔子免疫球蛋白G  規(guī)格： 48T/96T

 IgE  兔子免疫球蛋白E  規(guī)格： 48T/96T

 IgA  兔子免疫球蛋白A  規(guī)格： 48T/96T

 Sam  兔子可溶性粘附分子  規(guī)格： 48T/96T

 sVCAM-1  兔子可溶性血管細胞粘附分子1  規(guī)格： 48T/96T

 sEPCR  兔子可溶性血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體  規(guī)格： 48T/96T

 sICAM-1  兔子可溶性細胞間粘附分子1  規(guī)格： 48T/96T

 sCD40L  兔子可溶性白細胞分化抗原40配體  規(guī)格： 48T/96T

 sP-selectin  兔子可溶性P選擇素  規(guī)格： 48T/96T

 sE-selectin  兔子可溶性E選擇素  規(guī)格： 48T/96T

 ANGA  兔子抗中性粒細胞顆?？贵w  規(guī)格： 48T/96T

 MIP-5  兔子巨噬細胞炎性蛋白5  規(guī)格： 48T/96T

 MIP-1α/CCL3  兔子巨噬細胞炎性蛋白1α  規(guī)格： 48T/96T

 Collagenase II  兔子膠原酶II  規(guī)格： 48T/96T

 Collagenase I  兔子膠原酶I  規(guī)格： 48T/96T

 bFGF  兔子堿性成纖維細胞生長因子  規(guī)格： 48T/96T

 T4  兔子甲狀腺素  規(guī)格： 48T/96T

 TIMP-1  兔子基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1  規(guī)格： 48T/96T

 MMP-9  兔子基質(zhì)金屬蛋白酶9  規(guī)格： 48T/96T

 MMP-5  兔子基質(zhì)金屬蛋白酶5  規(guī)格： 48T/96T

 MMP-4  兔子基質(zhì)金屬蛋白酶4  規(guī)格： 48T/96T

 MMP-3  兔子基質(zhì)金屬蛋白酶3  規(guī)格： 48T/96T

 Cr  兔子骨膠原交聯(lián)  規(guī)格： 48T/96T

 T  兔子睪酮  規(guī)格： 48T/96T

 HGF  兔子肝細胞生長因子  規(guī)格： 48T/96T

 TE  兔子端粒酶  規(guī)格： 48T/96T

 CETP  兔子膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白  規(guī)格： 48T/96T

 MCP-1/CCL2/MCAF  兔子單核細胞趨化蛋白1  規(guī)格： 48T/96T

 PRL  兔子催乳素  規(guī)格： 48T/96T

 PRL  兔子催乳素  規(guī)格： 48T/96T

 ACTH  兔子促腎上腺皮質(zhì)激素  規(guī)格： 48T/96T

 FSH  兔子促卵泡素  規(guī)格： 48T/96T

 TSH  兔子促甲狀腺素  規(guī)格： 48T/96T

 LH  兔子促黃體激素  規(guī)格： 48T/96T

 LH  兔子促黃體激素  規(guī)格： 48T/96T

 E2  兔子雌二醇  規(guī)格： 48T/96T

 iFABP  兔子腸脂肪酸結(jié)合蛋白  規(guī)格： 48T/96T

 C3a  兔子補體片斷3a  規(guī)格： 48T/96T

 C4  兔子補體蛋白4  規(guī)格： 48T/96T

 EGF  兔子表皮生長因子  規(guī)格： 48T/96T

 LIFR  兔子白血病抑制因子受體  規(guī)格： 48T/96T

 LTB4  兔子白三烯B4  規(guī)格： 48T/96T

 IL-4  兔子白介素4  規(guī)格： 48T/96T

 IL-3  兔子白介素3  規(guī)格： 48T/96T

 IL-2  兔子白介素2  規(guī)格： 48T/96T

 IL-1sR Ⅰ  兔子白介素1可溶性受體I   規(guī)格： 48T/96T

 IL-1β  兔子白介素1β   規(guī)格： 48T/96T

 IL-10  兔子白介素10  規(guī)格： 48T/96T

 IL-1  兔子白介素1  規(guī)格： 48T/96T

 IFN-γ  兔子γ干擾素  規(guī)格： 48T/96T

 β-TG  兔子β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白  規(guī)格： 48T/96T

 IFN-α  兔子α干擾素  規(guī)格： 48T/96T

 S-100  兔子S100蛋白  規(guī)格： 48T/96T

 S-100B  兔子S100B蛋白  規(guī)格： 48T/96T

 E-Selectin/CD62E  兔子E選擇素  規(guī)格： 48T/96T

 D2D  兔子D二聚體  規(guī)格： 48T/96T

 CRP  兔子C反應蛋白  規(guī)格： 48T/96T

 Bcl-2  兔子B細胞淋巴瘤因子2  規(guī)格： 48T/96T

 PⅢNP  兔子Ⅲ型前膠原肽  規(guī)格： 48T/96T

 PⅢNT  兔子Ⅲ型前膠原氨基端肽  規(guī)格： 48T/96T

 Col Ⅲ  兔子Ⅲ型膠原  規(guī)格： 48T/96T

 Col Ⅱ  兔子Ⅱ型膠原  規(guī)格： 48T/96T

 PⅠCP  兔子Ⅰ型前膠原羧基端肽  規(guī)格： 48T/96T

 Col Ⅰ  兔子Ⅰ型膠原  規(guī)格： 48T/96T

 TGFβ2  兔轉(zhuǎn)化生長因子β2  規(guī)格： 48T/96T

 MHCⅡ/RLAⅡ  兔主要組織相容性復合體Ⅱ類  規(guī)格： 48T/96T

 MHCⅠ/RLAⅠ  兔主要組織相容性復合體Ⅰ類  規(guī)格： 48T/96T

 Lp-α  兔脂蛋白α  規(guī)格： 48T/96T

 Apo-E  兔載脂蛋白E  規(guī)格： 48T/96T

 apo-B100  兔載脂蛋白B100  規(guī)格： 48T/96T

 apo-A1  兔載脂蛋白A1  規(guī)格： 48T/96T

 iNOS  兔誘導型一氧化氮合成酶  規(guī)格： 48T/96T

 OSM  兔抑瘤素M  規(guī)格： 48T/96T

 AChRab  兔乙酰膽堿受體抗體  規(guī)格： 48T/96T

 ACh  兔乙酰膽堿  規(guī)格： 48T/96T