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                                        原鈣黏素γA2(PCDHγA2)ELISA試劑盒標本說明

原鈣黏素γA2(PCDHγA2)ELISA試劑盒試驗原理：
BFGF試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知BFGF濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將BFGF和生物素標記的抗體同時溫育。人堿性成纖維細胞生長因子ELISA 檢測試劑盒洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中BFGF的濃度呈比例關(guān)系。

原鈣黏素γA2(PCDHγA2)ELISA試劑盒自備材料
1．蒸餾水。
2．加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3．振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
1．避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2．實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

原鈣黏素γA2(PCDHγA2)ELISA試劑盒操作注意事項
1．試劑應(yīng)按標簽儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄，不可保存。
2．實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
3．不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4．使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5．使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6．洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。
7．底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8．加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
9．按照中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

原鈣黏素γA2(PCDHγA2)ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法
1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備
標準品：標準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。

2．洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

原鈣黏素γA2(PCDHγA2)ELISA試劑盒操作步驟
1．使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2．根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3．加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
4．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5．每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7．每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8．取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9．在450nm波長處測定各孔的OD值。

局限
6號標準品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到的結(jié)果。

原鈣黏素γA2(PCDHγA2)ELISA試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

原鈣黏素γA2(PCDHγA2)ELISA試劑盒結(jié)果判斷與分析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應(yīng)的BFGF標準品濃度為橫坐標（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的BFGF含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度。

3、檢測值范圍：0-800pg/ml

4、敏感度： 1.0 pg/ml

葡萄糖酪胨瓊脂   250g    用于食品中臘樣芽孢桿菌鑒定和計數(shù)（APHA方法）

Dextrose Casein-peptone Agar       

多粘菌素B（1萬單位）    1萬單位*5支 添加于100mlHB0249或HB0280或HB0248-1或HB0248中

Polymyxin B    

溶菌酶肉湯基礎(chǔ)   250g    用于蠟樣芽孢桿菌的溶菌酶試驗

Lysozyme Broth Base    

脫纖維羊血  50ml    每100mlHB0251中加入7ml脫纖維羊血

Off fiber sheep blood      

多粘菌素B（1000IU*5）   3.3mg/支*5  每支添加于100mlHB0249中

多粘菌素B   2.25萬單位*5支  添加到HB0249-1中

含225mL胰酪胨大豆多粘菌素肉湯均質(zhì)袋  10個/包 用于蠟樣芽孢桿菌的檢測

D-甘露醇發(fā)酵管（枯草芽孢桿菌）    20支    用于枯草芽孢桿菌生化試驗

丙酸鹽（枯草芽孢桿菌）   20支    用于枯草芽孢桿菌生化試驗

胰酪胨大豆多粘菌素肉湯基礎(chǔ)    250g    用于蠟樣芽孢桿菌選擇性的增菌培養(yǎng)

Trypticase-Soy-Polymyxin Broth Base    

肝湯    250g    用于嗜熱菌芽孢的鑒別培養(yǎng)

Liver Broth    

改良甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂基礎(chǔ)    250g    用于蠟樣芽孢桿菌分離培養(yǎng)和計數(shù)

Mannitol-Egg-Yolk-Polymycin Agar Base,Modified     

NAC瓊脂培養(yǎng)基   250g    用于綠膿假單胞菌的分離培養(yǎng)

NAC Agar Medium    

NAC液體培養(yǎng)基   250g    用于綠膿假單胞菌的增菌培養(yǎng)

NAC Solid Medium       

NGKG寒天基礎(chǔ)培地    250g    用于食品中蠟樣芽孢桿菌分離培養(yǎng)

NGKG Medium    

產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗培養(yǎng)基      

D-環(huán)絲氨酸  0.2g    每支過濾除菌后添加于500mlSC瓊脂基礎(chǔ)或500ml TSC中

D-cycloserine      

產(chǎn)芽孢肉湯  250g    用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的產(chǎn)芽孢培養(yǎng)(SN標準)

Sporulation Broth      

多粘菌素B（1.2mg）  1.2mg/支*5  每支添加于100mlSPS中

Polymyxin B    

多價蛋白胨-酵母膏（PY）培養(yǎng)基 250g    用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的培養(yǎng)(SN標準)

Poly Peptone Yeast Extract Medium      

動力-硝酸鹽培養(yǎng)基    250g    用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的動力試驗

Power - nitrate medium     

梭菌鑒別瓊脂（DCA）  250g    用于干燥食品亞硫酸鹽還原梭菌的計數(shù)和培養(yǎng)

Differentia Clostridial Agar       

強化梭菌鑒別瓊脂（DRCA） 250g    用于食品和其它物質(zhì)中梭菌的計數(shù)和培養(yǎng)（MERCK方法）

Differentia Reinforced Clostridial Agar    

強化梭菌瓊脂 250g    用于梭菌的分離培養(yǎng)

Reinforced Clostridium Agar    

強化梭菌培養(yǎng)基（RCM）    250g    用于梭菌的分離培養(yǎng)

Reinforced Clostridium Medium      

TSN瓊脂 250g    用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的平板計數(shù)

TSN Agar       

TBB培養(yǎng)基   250g    用于乳酪產(chǎn)品中梭菌的計數(shù)

Tyrobutyricum Broth Base       

CHO培養(yǎng)基基礎(chǔ)   250g    用于厭氧菌的糖生化反應(yīng)

CHO Medium Base    

SCHAEDLER瓊脂   250g    用于厭氧菌的分離培養(yǎng)

SCHAEDLER AGAR     

厭氧菌瓊脂  250g    用于厭氧菌的分離培養(yǎng)

Anaerobic Agar     

CDC厭氧菌瓊脂   250g    用于厭氧菌的分離培養(yǎng)

CDC Anaerobic Agar     

亞硫酸鹽還原厭氧菌孢子液體培養(yǎng)基  250g    用于亞硫酸鹽還原厭氧菌孢子的增菌培養(yǎng)。

Sulfite Reducing Anaerobes Spore Liquid Medium     

皰肉培養(yǎng)基（液體）（試管）    1支 用于肉毒梭菌及厭氧梭狀芽孢桿菌的檢驗(GB標準)。

Cooked Meat Medium Base    

磺胺嘧啶鈉溶液（12mg）   1ml*5   每支添加于100mlSPS中

Sodium sulfadiazine    

WILKINS-CHALGREN瓊脂    250g    用于厭氧菌的分離培養(yǎng)

WILKINS-CHALGREN Agar      

MCP瓊脂 250g    用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的計數(shù)和培養(yǎng)

MCP Agar       

SC瓊脂基礎(chǔ)  250g    用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的計數(shù)和培養(yǎng)，需天極D-環(huán)絲氨酸和50%卵黃乳液（ISO標準）

Sulfite Cycloserine Agar Base