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赤羽病試劑盒檢測(cè)說(shuō)明書(shū)
閱讀:45 發(fā)布時(shí)間:2016-5-4提 供 商 | 上海撫生實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 87.3KB |
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赤羽病試劑盒檢測(cè)說(shuō)明書(shū)
試劑 盒使用說(shuō)明書(shū)
本試劑盒僅供研究使用。
96T
使用目的 :
本試劑盒用于測(cè)定牛血清、血漿及相關(guān)液體樣本中赤羽?。ˋD)表達(dá)。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中牛赤羽?。ˋD)表達(dá)。用純化的牛赤羽?。ˋD)抗
體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中赤羽?。ˋD)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗
原和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的赤羽?。ˋD)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,
經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下
轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),與 CUTOFF 值相比較,
從而判定標(biāo)本中牛赤羽?。ˋD)的存在與否。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 陽(yáng)性對(duì)照 0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 陰性對(duì)照 0.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說(shuō)明書(shū) 1 份
5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)
標(biāo)本 要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1
孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2. 加樣:分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50µl。然后在待測(cè)樣品孔先
加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測(cè)樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不
觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,
3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復(fù) 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
計(jì)算和結(jié)果判定 :
試驗(yàn)有效性:陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10
臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
陰性判定:樣品 OD 值< 臨界值(CUT OFF)者為牛赤羽?。ˋD)陰性
陽(yáng)性判定:樣品 OD 值≥ 臨界值(CUT OFF)者為牛赤羽病(AD)陽(yáng)性
。
注意事項(xiàng)
1.操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未
用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物請(qǐng)避光保存。
6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),參考波長(zhǎng)為 630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸,使用時(shí)必須
注意安全。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 個(gè)月