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人ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)小竅門
閱讀:110 發(fā)布時間:2018-1-5提 供 商 | 上海撫生實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 140.1KB |
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人ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)小竅門。
1、室溫下復(fù)溫30Min 0.01MPBS清洗5Min×3;
2、加入配好的0.3% TritonX100 30Min。以增加細(xì)胞的通透性,0.01MPBS清洗5Min×3;
3、5%小牛血清封閉1 h0. 01 MPBS清洗5 Min×3;
4、加入用血清稀釋液稀釋的一抗,4 ℃存放24-48 h;吸去抗體,0.01MPBS洗5Min×3;
5、加入配好的0.3%的過氧化氫甲醇溶液30Min。以消除內(nèi)源性過氧化物酶的影響,0.01MPBS清洗5Min×3;
6、加入0.01MPBS稀釋的的二抗.室溫孵育2h。0.01MKPBS洗5Min×3;
7、加入ABC復(fù)合物之類的抗體.室溫孵育2h。0.01MPBS洗5Min×3;蒸餾水迅速沖三次;
8、加入顯色液,進(jìn)行免疫組織化學(xué)顯色。時間一般不超過30Min.可不時在顯微鏡下進(jìn)行觀察,待細(xì)胞著色而背底顏色較淡時馬上吸去顯色液。用蒸餾水迅速沖三次后加入0.01MKPBS終止反應(yīng);
9、梯度酒精脫水之后,封片、拍照。
細(xì)節(jié)將消除內(nèi)源性過氧化物酶這一步放在后面,能避免雙氧水對目的蛋白的影響。
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