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小鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中遇到的問(wèn)題分析
閱讀:88 發(fā)布時(shí)間:2018-3-14提 供 商 | 上海撫生實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 13.4KB |
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小鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中遇到的問(wèn)題分析
(1)游離熒光素殘留在二抗中。一部分熒光素未與蛋白質(zhì)結(jié)合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去。二抗配置時(shí)用透析法或?qū)游龇ǚ蛛x熒光素標(biāo)記的二抗和游離的二抗。購(gòu)買(mǎi)高質(zhì)量、高純度的熒光素二抗。
(2)抗體以外的血清蛋白與熒光素結(jié)合形成熒光素脲蛋白,可與組織成分結(jié)合。
(3)組織抗原封閉不全。除去檢查的抗原以外,組織中還可能存在類(lèi)屬抗原(如Forssman氏抗原),可與組織中特異性抗原以外之之相應(yīng)抗體結(jié)合。延長(zhǎng)血清封閉時(shí)間。
(4)從組織中難于提純抗原性物質(zhì),所以制備的免疫血清中往往混雜一些抗其他組織成分的抗體,以致容易混淆。
(5)抗體分子上標(biāo)記的熒光素分子太多,這種過(guò)量標(biāo)記的抗體分子帶過(guò)多的陰離子,可吸附于正常組織上而呈現(xiàn)非特異性染色。
(6)熒光素不純、標(biāo)本固定不當(dāng)?shù)取?br />(7)一抗和二抗孵育條件和濃度不合適。調(diào)整一抗和二抗孵育條件和濃度至zuijia。
(8)一抗和二抗孵育后的清洗不充分。增加清洗次數(shù)和延長(zhǎng)清洗時(shí)間。
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小鼠ELISA試劑盒