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撫生試劑-化學(xué)發(fā)光探針檢測(cè)技術(shù)速查病原菌
閱讀：195 發(fā)布時(shí)間：2014-1-14化學(xué)發(fā)光探針檢測(cè)技術(shù)速查病原菌
吉林檢驗(yàn)檢疫局建立的金標(biāo)法檢測(cè)單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌技術(shù)作為當(dāng)今檢測(cè)病原體和診斷疾病方面zui為敏感的免疫學(xué)技術(shù)之一，不僅操作簡(jiǎn)便、快速、特異，更為重要的是適用于廣大基層食品監(jiān)管部門的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和診斷，這些特點(diǎn)都是其他免疫學(xué)方法所*的。
該技術(shù)不僅具有巨大的發(fā)展?jié)摿?，而且還具有廣闊的市場(chǎng)和應(yīng)用前景，如可適用于醫(yī)療衛(wèi)生行業(yè)，出入境食品口岸抽查和鑒定、流通領(lǐng)域衛(wèi)生監(jiān)督和工商行政部門和質(zhì)監(jiān)部門的食品企業(yè)監(jiān)管等，甚至可以走進(jìn)餐館、家庭進(jìn)行簡(jiǎn)易的食品自控和檢測(cè)等。
由吉林出入境檢驗(yàn)檢疫局承擔(dān)的國家質(zhì)檢總局科研課題《應(yīng)用化學(xué)發(fā)光探針及免疫金標(biāo)法檢測(cè)食品中多種致病菌的研究》在2011年獲得了國家質(zhì)檢總局“科技興檢”三等獎(jiǎng)。該課題建立的化學(xué)發(fā)光探針檢測(cè)技術(shù)能夠快速檢測(cè)食品中常見的四種病原菌：空腸彎曲菌、單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌、大腸桿菌O157和金黃色葡萄球菌。其中對(duì)單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌還建立了應(yīng)用免疫膠體金試紙條的快速檢測(cè)方法。
急需速測(cè)技術(shù)
我國的食品加工企業(yè)數(shù)量多，規(guī)模小，較分散，而且為數(shù)較多企業(yè)過分追求利潤法律意識(shí)淡薄，社會(huì)責(zé)任心不強(qiáng)導(dǎo)致其產(chǎn)品質(zhì)量良莠不齊。
據(jù)報(bào)道，我國45萬個(gè)食品企業(yè)中，員工人數(shù)10人以下的食品加工小作坊就有35萬家，約占80%，因而導(dǎo)致食品安全事故時(shí)有發(fā)生，給社會(huì)和消費(fèi)者的健康造成了巨大危害。
而目前的食品衛(wèi)生監(jiān)管的檢測(cè)手段主要依據(jù)或規(guī)定方法進(jìn)行，雖然這些方法準(zhǔn)確可靠，但這些方法一般都需要建設(shè)專門的微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，配備專業(yè)的檢測(cè)技術(shù)人員，需要較長(zhǎng)的檢測(cè)周期，由此造成的檢測(cè)成本過高，缺乏時(shí)效性等問題，使一些突發(fā)的食品安全事件不能迅速得以解決。因此發(fā)展和建立一種快速、簡(jiǎn)便、靈敏準(zhǔn)確的檢測(cè)技術(shù)，作為標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法的初篩技術(shù)，是解決上述問題的有效手段之一。
食品檢驗(yàn)新兵
化學(xué)發(fā)光探針技術(shù)的原理是互補(bǔ)的核酸單鏈會(huì)特異性識(shí)別并結(jié)合成穩(wěn)定的雙鏈復(fù)合物。這一檢測(cè)系統(tǒng)利用一個(gè)標(biāo)記有化學(xué)發(fā)光物的單鏈DNA探針，可以特異性的識(shí)別和結(jié)合目標(biāo)微生物的核糖體RNA。微生物中的核糖體RNA釋放出來后，化學(xué)發(fā)光標(biāo)記的DNA探針就與之結(jié)合形成穩(wěn)定的DNA-RNA雜合體。標(biāo)記的DNA-RNA雜合體會(huì)與非雜交探針分離，并在化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀中進(jìn)行測(cè)量。樣本的檢測(cè)結(jié)果通過計(jì)算與陰性對(duì)照進(jìn)行比較得出結(jié)果。利用化學(xué)發(fā)光劑標(biāo)記和檢測(cè)核酸使得許多非放射性標(biāo)記檢測(cè)的靈敏度達(dá)到甚至超過了同位素標(biāo)記測(cè)定。
在眾多的化學(xué)發(fā)光體系中，應(yīng)用zui多的化學(xué)發(fā)光體主要有三類：增強(qiáng)魯米諾發(fā)光體系、吖啶類化合物發(fā)光體系和堿性磷酸酶催化的1，2-二氧環(huán)己烷發(fā)光體系。吉林檢驗(yàn)檢疫局建立的化學(xué)發(fā)光技術(shù)使用吖啶酯標(biāo)記核酸探針。
利用化學(xué)發(fā)光雜交保護(hù)分析的原理檢測(cè)空腸彎曲菌、單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌、大腸桿菌O157和金黃色葡萄球菌4種致病菌特異性RNA序列，這種方法無需物理分離，利用吖啶酯標(biāo)記DNA探針，通過核酸雜交保護(hù)分析法，即應(yīng)用人工合成的靶DNA保守區(qū)的寡核苷酸，在合成時(shí)引入一個(gè)烷氨基的手臂，經(jīng)活化后接上吖啶酯，制成化學(xué)發(fā)光探針。
雜交后無需分離步驟，而是利用差分水解來鑒別，即加入堿性溶液，游離的發(fā)光探針遇堿水解失去發(fā)光特性，而與特異性目的片段結(jié)合的探針形成DNA-RNA雜交體，由于吖啶酯是平面結(jié)構(gòu)很容易進(jìn)入雙螺旋的內(nèi)部而獲得雜交保護(hù)，水解速度緩慢(半衰期達(dá)10分鐘以上)，仍有發(fā)光性能，可以在發(fā)光儀上顯示化學(xué)發(fā)光信號(hào)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)病原菌的檢測(cè)。
應(yīng)用前景廣闊
該項(xiàng)目利用膠體金技術(shù)研制了膠體金檢測(cè)試紙條，用于單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌的快速檢測(cè)，該檢測(cè)試紙條的靈敏度高，具有很強(qiáng)的特異性，不同批次的免疫膠體金具有良好的檢測(cè)重現(xiàn)性，穩(wěn)定性好，操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)時(shí)間只需10至20min即可報(bào)告結(jié)果，膠體金法無污染，不會(huì)危害操作者以及環(huán)境。膠體金抗體復(fù)合物在凍干狀態(tài)下室溫儲(chǔ)存相當(dāng)穩(wěn)定，有效期長(zhǎng);此外膠體金技術(shù)還具有檢測(cè)迅速、靈敏、不需要復(fù)雜儀器設(shè)備、產(chǎn)品褪色等優(yōu)點(diǎn)，適合于食品中單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌的初篩檢驗(yàn)。
吉林檢驗(yàn)檢疫局建立的基因探針化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法可在30分鐘內(nèi)快速確定病原體，并可直接于固體或液體培養(yǎng)基上鑒定目標(biāo)微生物。該方法可直接應(yīng)用于國外的LEADER 50i檢測(cè)儀上，儀器自動(dòng)注入檢測(cè)試劑，立刻測(cè)量標(biāo)記物所產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度，并自動(dòng)計(jì)算結(jié)果及打印報(bào)告，該檢測(cè)方法敏感性高，特異性強(qiáng)，檢測(cè)成本低，操作簡(jiǎn)便、快速，對(duì)我國食品安全快速檢測(cè)和監(jiān)控工作具有重要意義，具有廣泛的推廣前景。