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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1470 | 主要用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
| 組織來源 | 眼角膜組織 | 種屬來源 | 人 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
詳細(xì)介紹
一、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 人角膜上皮細(xì)胞 | 商品貨號 | A01X1470 |
組織來源 | 眼角膜組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 人 | 傳代特性 | 可傳2-3代 |
生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
細(xì)胞簡介 |
人角膜上皮細(xì)胞分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部薄。角膜有十分敏感的神經(jīng)末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會(huì)不由自主地合上以保護(hù)眼睛。為了保持透明，角膜并沒有血管，透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細(xì)胞層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層、內(nèi)皮細(xì)胞層。其主要功能如下：①角膜是的無血管的組織，具有透明的特性和合成許多蛋白的功能，分三層細(xì)胞層，外層即是上皮細(xì)胞；②角膜上皮細(xì)胞能參與先天性免疫，能感應(yīng)病原體存在并發(fā)出信號從而激活角膜防御系統(tǒng)；③角膜上皮細(xì)胞能高效表達(dá)醛脫氫酶。角膜上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)對研究角膜的生理學(xué)、病理學(xué)、免疫學(xué)以及分子生物學(xué)都是極為重要的手段，常用于研究細(xì)胞代謝產(chǎn)物、病毒感染、各種生長因子和藥物對細(xì)胞生長的影響。 |
包被條件： 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺(tái)中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人小腸細(xì)胞
人角質(zhì)細(xì)胞
人正常肝細(xì)胞
人肝細(xì)胞
人膀胱鱗癌細(xì)胞
膀胱移行癌細(xì)胞
人鼻咽癌細(xì)胞
鼻咽癌人亞株細(xì)胞
人舌鱗癌細(xì)胞系
人喉癌細(xì)胞
人肝膽管癌細(xì)胞
人急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞
人單核細(xì)胞白血病
急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞
人急性T細(xì)胞白血病細(xì)胞
Massilia flavus黃色馬賽菌
Massilia brevitales短桿狀馬賽菌
Massilia jejuensis濟(jì)州島馬賽菌
Massilia niastensis尼阿斯賽菌
Meiothermus cateniformans鏈形稍棲熱菌
Meridianimaribacter flavus黃色南海桿菌
Massilia timonae蒂莫醫(yī)院馬賽菌
Mesorhizobium septentrionale北方中間根瘤菌
Mesorhizobium temperatum溫暖區(qū)中間根瘤菌
Microbacterium barkeri巴氏微桿菌
人角膜上皮細(xì)胞Microbacterium arborescens樹狀微桿菌
Microbacterium agarici蘑菇微桿菌
Microbacterium imperiale蛾微桿菌
Microbacterium flavescens淺黃微桿菌
Microbacterium lacticrum乳微桿菌
原代細(xì)胞使用方法：
是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈上皮細(xì)胞樣，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
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