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詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 人甲狀腺上皮細胞 | 商品貨號 | A01X1343 |
組織來源 | 甲狀腺組織 | 產品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 人 | 傳代特性 | 細胞特性確定傳代 |
生長特性 | 貼壁培養(yǎng) | 細胞形態(tài) | 上皮樣，多角形細胞 |
細胞簡介 |
甲狀腺是脊椎動物非常重要的腺體， 屬于內分泌器官。在哺乳動物它位于頸部甲 狀軟骨下方，氣管兩旁。人類的甲狀腺形似蝴蝶。甲狀腺控制使用能量的速度、 制造蛋白質、調節(jié)身體對其他荷爾蒙的敏感性。 甲狀腺由許多濾泡組成， 濾泡由單純的立方腺上皮細胞環(huán)繞而成， 中心為濾泡腔 。腺上皮細胞是甲狀腺激素合成和釋放的部位 ，濾泡腔內充滿均勻的膠性物質， 是甲狀腺激素復合物，也是甲狀腺激素的貯存庫。濾泡形態(tài)學的改變可反映腺體 功能狀態(tài)： 腺體活動減弱時，腺上皮細胞呈扁平狀，濾泡腔內貯存物增加； 如果 活動亢進， 腺泡上皮呈柱狀，濾泡腔內貯存物減少。 |
包被條件：
培養(yǎng)基：原代上皮細胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相： 空氣，95%；CO2 ，5%
原代細胞實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質。
五、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁培養(yǎng)細胞，細胞形態(tài)呈上皮樣，多角形細胞，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱)。
5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產品：
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大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞
人Burkkit淋巴瘤細胞
小鼠食管癌細胞
小鼠肥大細胞
小鼠髓系白血病細胞
人卵巢透明細胞癌細胞
人心臟微血管內皮細胞
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正常人腎成纖維細胞
人甲狀腺乳頭狀癌細胞
人漿細胞骨髓瘤細胞
人彌漫大B淋巴瘤細胞
小鼠膀胱平滑肌細胞
人胚胎肝細胞
Intrasporangium chromatireducens鉻酸鹽還原間孢囊菌
Janibacter melonis檸檬兩面神菌
Jeotgalibacillus alimentarius食物咸海鮮芽孢桿菌
Jeotgalicoccus halotolerans耐鹽咸海鮮球菌
Jeotgalicoccus halophilus嗜鹽咸海鮮球菌
Jeotgalicoccus marinus海洋咸海鮮球菌
Jeotgalicoccus pinnipedialis嗜腳動物咸海鮮球菌
Knoellia flava黃色諾爾氏菌
Klebsiella pneumoniae肺炎克雷伯氏菌
Kocuria carniphila嗜肉考克氏菌
人甲狀腺上皮細胞Kushneria indalinina英多羅克克錫勒氏菌
Lacibacter cauensis中國農大湖積物桿菌
Lactobacillus antri胃竇乳桿菌
Lactobacillus bobalius巴博乳桿菌
Lactobacillus cacaonum可可乳桿菌
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