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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1710 | 主要用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
| 組織來源 | 腦組織 | 種屬來源 | 大鼠 |
| 生長特性 | 懸浮 | 細(xì)胞形態(tài) | 球形 |
詳細(xì)介紹
一、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 大鼠神經(jīng)干細(xì)胞 | 商品貨號 | A01X1710 |
組織來源 | 腦組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 大鼠 | 傳代特性 | 可傳2-3代 |
生長特性 | 懸浮 | 細(xì)胞形態(tài) | 球形 |
包被條件：
培養(yǎng)基：含B-27 Supplement、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：1:2
消化液：0.25%胰蛋bai酶，Accutase
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞簡介 |
大鼠神經(jīng)干細(xì)胞分離自腦皮層組織；大腦分左右兩個(gè)半球，大腦皮質(zhì)(灰質(zhì))覆蓋著每個(gè)大腦半球的大部分，它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。每一個(gè)半球都有三個(gè)面，即外側(cè)面(約占整個(gè)皮質(zhì)面積的1/3)、內(nèi)側(cè)面和底面(占2/3的面積)；半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積；大腦外側(cè)面重要的溝、裂有大腦外側(cè)裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔，使大腦皮質(zhì)組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。神經(jīng)干細(xì)胞具有分化為神經(jīng)神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞的能力，能自我更新，并足以提供大量腦組織細(xì)胞的細(xì)胞群。神經(jīng)干細(xì)胞是一類具有分裂潛能和自更新能力的母細(xì)胞，它可以通過不對等的分裂方式產(chǎn)生神經(jīng)組織的各類細(xì)胞。需要強(qiáng)調(diào)的是，在腦脊髓等所有神經(jīng)組織中，不同的神經(jīng)干細(xì)胞類型產(chǎn)生的子代細(xì)胞種類不同，分布也不同。神經(jīng)干細(xì)胞作為干細(xì)胞的一種，它具有其它所有干細(xì)胞的基本特征：具有自我維持和自我更新能力，具有多種分化潛能，具有分化為本系統(tǒng)大部分類型細(xì)胞的能力，這種自我更新和分化潛能可以維持相當(dāng)長的時(shí)間甚至終生，對損傷和疾病具有反應(yīng)能力。神經(jīng)干細(xì)胞在疾病、損傷狀態(tài)下具有增殖、遷移，并向神經(jīng)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞分化的能力，已成為神經(jīng)系統(tǒng)損傷修復(fù)和再生研究的熱點(diǎn)，體外建立穩(wěn)定的神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)模型是其基礎(chǔ)和臨床應(yīng)用的前提。神經(jīng)干細(xì)胞在培養(yǎng)3-4d后，可形成神經(jīng)球，神經(jīng)球在培養(yǎng)基中呈懸浮生長，予以更換半量培基，1周后用吸管輕柔吹打球形克隆成為小的神經(jīng)球和單細(xì)胞懸液，將部分細(xì)胞接種到新的培養(yǎng)瓶中，2×105個(gè)細(xì)胞/瓶，每7-10d傳代1次，每隔3d離心更換半量培養(yǎng)基1次，培養(yǎng)條件不變。 |
原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
原代細(xì)胞使用方法：
是一種懸浮細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈球形，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H82(STR鑒定正確)
大鼠空腸膠質(zhì)細(xì)胞EGC CRL-2690（種屬鑒定）
非洲綠猴腎細(xì)胞VERO（種屬鑒定）
人腦神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SK-N-AS(STR鑒定正確)
人腎癌細(xì)胞769-P(STR鑒定正確)
人乳腺腺癌細(xì)胞帶熒光素酶SK-BR-3+LUC（STR鑒定）
人食管鱗癌細(xì)胞KYSE-150(STR鑒定正確)
人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞LN-18(STR鑒定正確)
小鼠垂體瘤細(xì)胞AtT-20（種屬鑒定）
人急性原粒細(xì)胞白血病細(xì)胞 KASUMI-1(STR鑒定正確)
人骨肉瘤細(xì)胞HOS(STR鑒定正確)
人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞NCM-460(STR鑒定正確)
小鼠小腦細(xì)胞 C8-D1A（種屬鑒定）
人淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞A3(STR鑒定正確)
人大細(xì)胞肺癌耐藥株NCI-H460/cis (STR鑒定正確)
粘帚霉屬菌Gliocladium sp.
展開青霉Penicillium patulum STP-A
粘束梗霉屬Graphium sp.
粘紅酵母菌Rhodotorula glutinis
氈狀金孢霉Chrysosporium pannorum
早期鏈霉菌Streptomyces praecox
云南游動(dòng)放線菌Actinoplanes yunnanensis
云南葡萄穗霉Stachybotrys yunnanensis
雜色純潔桿菌Modestobacter versicolor
雜色曲霉Aspergillus versicolor
大鼠神經(jīng)干細(xì)胞游動(dòng)放線菌屬Actinoplanes sp.
游動(dòng)放線菌菌種Actinoplanes sp.
疣狀金孢霉Chrysosporium verrucosum
猶他游動(dòng)放線菌Actinoplanes utahensis
瑩光威克酵母Wickerhamia fluorescens
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