詳細介紹
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
產(chǎn)品名稱 | 磷酸化原癌基因c-Raf抗體 |
英文名稱 | phospho-c-Raf(Ser338/Tyr340) |
規(guī)格 | 0.1ml |
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公司專業(yè)供應的抗體,抗體是用于化學反應、分析化驗、研究實驗、教學實驗、化學配方使用的純凈化學品,產(chǎn)品品質(zhì),價格實惠,多種規(guī)格供應,售后完善。抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標記技術:
(一)原理
當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應。蛋白質(zhì)分子可進行鹵化反應的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應。
(二)準備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
大鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子受體2(VEGFR-2/Flk-1)蘇云金芽孢桿菌松躅亞種拉丁屬名: Bacillus thuringiensis subsp. dendrolimus
大鼠肝細胞生長因子(HGF)矩圓黑盤孢注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
大鼠糖蛋白130(gp130)嗜麥芽糖寡養(yǎng)單胞菌拉丁屬名: Stenotrophomonas maltophilia
大鼠生長激素(GH)枯斑擬盤多毛孢注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
大鼠粒細胞集落刺激因子(G-CSF)地衣芽胞桿菌拉丁屬名: Bacillus licheniformis
大鼠中性粒細胞趨化蛋白2(NAP-2/CXCL7)環(huán)發(fā)仙菌拉丁屬名: Pilimelia anulata
大鼠FMS樣酪氨酸激酶3(Flt3)擬無枝菌酸菌拉丁屬名: Amycolatopsis sp.
大鼠FMS樣酪氨酸激酶3配體(Flt3L)產(chǎn)黃青霉拉丁屬名: Penicillium chrysogenum
大鼠堿性成纖維細胞生長因子9(bFGF-9)費氏中華根瘤菌用途: 能在大豆上結(jié)瘤固氮,YMA培養(yǎng)基上生長速度快,產(chǎn)酸
大鼠堿性成纖維細胞生長因子4(bFGF-4)聚多曲霉拉丁屬名: Aspergillus sydowii
大鼠堿性成纖維細胞生長因子6(bFGF-6)維氏氣單胞菌拉丁屬名: Aeromonas veronii
大鼠酸性成纖維細胞生長因子1(aFGF-1)塔賓曲霉拉丁屬名: Aspergillus tubingensis
大鼠凋亡相關因子配體(FASL) 發(fā)酵性酵母注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
大鼠凋亡相關因子(FAS/CD95)淺綠黃鏈霉菌拉丁屬名: Streptomyces galbus
大鼠紅細胞生成素(EPO) 紅緣擬層孔菌拉丁屬名: Fomitopsis pinicola
大鼠紅細胞生成素受體(EPOR)煙曲霉拉丁屬名: Aspergillus fumigatus
磷酸化原癌基因c-Raf抗體細胞質(zhì)膜微囊蛋白-1抗體Ciwujiaside E中文名:別名:Guaianin A分子式:C40H62O11
CD38抗體Cimigel-3-one中文名:升麻酮別名:分子式:C30H46O5
碳酸酐酶1抗體β-Hederin中文名:五加苷K別名:Eleutheroside K分子式:C41H66O11
碳酸酐酶2抗體Ketohakonal中文名:別名:分子式:C29H48O2
絲/蘇氨酸蛋白質(zhì)激酶抗體Casein kinase Ⅱα(CKⅡα)Tetrahymal中文名:四膜蟲醇別名:Gammaceran-3β-ol; Wallichiniol分子式:C30H52O