詳細介紹
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
產(chǎn)品名稱 | 芳香基硫酸酯酶1抗體 |
英文名稱 | ARSA |
規(guī)格 | 0.2ml |
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公司專業(yè)供應的抗體,抗體是用于化學反應、分析化驗、研究實驗、教學實驗、化學配方使用的純凈化學品,產(chǎn)品品質(zhì),價格實惠,多種規(guī)格供應,售后完善??贵w的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標記技術:
(一)原理
當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應。蛋白質(zhì)分子可進行鹵化反應的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應。
(二)準備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
17羥皮質(zhì)類固醇17-OHCS英文名稱:Hydroxycorticosteroids, 17-OHCS
白介素4IL-4英文名稱:Chicken Interleukin 4, IL-4
白介素2IL-2英文名稱:Chicken Interleukin 2, IL-2
一氧化氮NO英文名稱:Chicken nitric oxide, NO
單純皰疹病毒Ⅱ型抗體HSVⅡ-Ab英文名稱:Chicken Herpes simplexvirus Ⅱ antibody, HSVⅡ-Ab
補體3裂解產(chǎn)物C3SP英文名稱:Chicken Complement 3 split product, C3SP
腎上腺髓質(zhì)素ADM英文名稱:Chicken adrenomedullin, ADM
免疫核糖核酸Irna英文名稱:Chicken Immune RNA, Irna
β內(nèi)酰胺酶β-lactamase英文名稱:Chicken β-lactamase
流行性乙型腦炎抗體IgGJE IgG英文名稱:Chicken Japanese Encephalitis IgG, JE IgG
α葡萄糖苷酶a-Glu英文名稱:Chicken α-Glucosidase, a-Glu
血小板因子4PF-4/CXCL4英文名稱:Chicken Platelet Factor 4, PF-4
L苯丙氨酸解氨酶PAL英文名稱:Chicken L-Phenylalanine ammonla-lyase, PAL
煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NADPH英文名稱:Chicken nicotinamide adenine dinucleotide phosphate, NADPH
B因子BF英文名稱:Chicken factor B, BF
芳香基硫酸酯酶1抗體Alphaherpesvirinae Pseudorabies virus分離基物: 病豬提供形式: 凍結(jié)物安全等級: 2模式菌株: no應用領域: 教學研究培養(yǎng)基: 0生長條件: 37
Candida krusei提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 用于白酒生香(蟠桃香酵母)。培養(yǎng)基: YM培養(yǎng)基:酵母膏 3.0g,麥芽提取物 3.0g,葡萄糖 10.0g,蛋白胨 5.0g,瓊脂 20.0g,蒸餾水 1.0L,pH 6.2±0.2。121℃,15min滅菌。生長條件: 28-30℃,24-48h,好氧存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Pleurotus ostreatus提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25℃
Vibrio parahaemolyticus提供形式: 凍干物;凍結(jié)物模式菌株: no培養(yǎng)基: 820生長條件: 22℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Erythrobacter vulgaris分離基物: 沉積物/箱式沉積物提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 產(chǎn)酶微生物/產(chǎn)酪蛋白酶、淀粉酶、過氧化氫酶;未檢測到果膠酶、纖維素酶、瓊脂酶培養(yǎng)基: 471生長條件: 30℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Escherichia coli分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物;凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 動物疫苗培養(yǎng)基: 2生長條件: 37℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Rhizobium sp.分離基物: 根瘤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 63生長條件: 28存儲條件: 定期移植法
Bacillus thuringiensis分離基物: 1-5cm土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 用于抗蟲基因的分離和抗蟲相關基礎研究。培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法
Nocardiopsis rampartis分離基物: 古城墻的鹽堿土提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0243生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法