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公司產(chǎn)品僅供科研使用:
產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒100管/48樣 | 微量法 | 100管/48樣 | AS63211 |
商品介紹:
商品介紹 測定意義 輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(huán)(TCA)的主要氫受體,生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成ATP的同時,形成大量的ROS,同時NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和TCA循環(huán)的強弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態(tài)。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外,NAD+降解產(chǎn)物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調(diào)控作用。 測定原理 分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH,NADH通過PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在570nm下檢測吸光值;而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH,進一步采用MTT還原法檢測。 需自備的儀器和用品 可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
常見樣本處理方法:
1、血清(漿)樣品:直接檢測。
2、細菌、細胞或組織樣品的制備: 細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液) ,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次)8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。組織:按照組織質(zhì)量(g) :提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
產(chǎn)品優(yōu)點如下:
1、快速簡便:雙試劑,直接操作,快速、簡便。
2、取樣量微:需要的樣本量是羥胺法的1/10。
3、靈敏度高:檢測線0.5U/ml,是羥胺法5倍,鄰苯三酚法的200倍
4、穩(wěn)定性好:批內(nèi)CV=5.50%,批間CV=3.32%,試劑盒2~8℃存放3個月有效。
5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.2%。6、回收試驗: X =102.3%。7、受外界影響因素?。焊蓴_因素少,重復性強。且特異性強,不受類SOD物質(zhì)的干擾8、測試面廣:可測動物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細胞、細菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳。
測定步驟:
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準確
3.管底加樣,不能加在管壁上
4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴
1.加標本后和加結(jié)合物后,應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后,反應(yīng)的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃,ELISA板可避光放在實驗臺上,以便 不時觀察,待對照管顯色適當時,即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟,但卻 是決定實驗成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板
1.陰性對照顏色極淺,在定性測定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標儀測定結(jié)果,準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質(zhì) 量和軟件的算法。
乳酸脫氫酶(LDH)測試盒100管/48樣 輔酶Ⅰ系列
乳酸脫氫酶(LDH)測試盒50管/24樣 輔酶Ⅰ系列
NAD蘋果酸脫氫酶(NADMDH)測試盒100管/96樣 輔酶Ⅰ系列
NAD蘋果酸脫氫酶(NADMDH)測試盒50管/48樣 輔酶Ⅰ系列
NADP蘋果酸脫氫酶(NADPMDH)測試盒100管/96樣 輔酶Ⅰ系列
NADP蘋果酸脫氫酶(NADPMDH)測試盒50管/48樣 輔酶Ⅰ系列
線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ/NADH輔酶Q還原酶測試盒100管/96樣 輔酶Ⅰ系列
線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ/NADH輔酶Q還原酶測試盒25管/24樣 輔酶Ⅰ系列
NADH氧化酶(NOX)測試盒100管/96樣 輔酶Ⅰ系列
NADH氧化酶(NOX)測試盒50管/48樣 輔酶Ⅰ系列
檸檬酸合酶(CS)測試盒100管/48樣 輔酶Ⅰ系列
檸檬酸合酶(CS)測試盒50管/24樣 輔酶Ⅰ系列
檸檬酸合酶(CS)測試盒25管/12樣 輔酶Ⅰ系列
丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒100管/96樣 輔酶Ⅰ系列
丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒50管/48樣 輔酶Ⅰ系列
乙醇含量測試盒100管/96樣 輔酶Ⅰ系列
乙醇含量測試盒50管/48樣 輔酶Ⅰ系列
乙醇脫氫酶(ADH)測試盒100管/96樣 輔酶Ⅰ系列
乙醇脫氫酶(ADH)測試盒50管/48樣 輔酶Ⅰ系列
單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒100管/96樣 輔酶Ⅰ系列
單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒50管/48樣 輔酶Ⅰ系列
甲醛脫氫酶(FDH)測試盒100管/96樣 輔酶Ⅰ系列
甲醛脫氫酶(FDH)測試盒50管/48樣 輔酶Ⅰ系列
乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒100管/96樣 輔酶Ⅰ系列
乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒50管/48樣 輔酶Ⅰ系列
輔酶ⅡNADP(H)含量測試盒100管/48樣 輔酶Ⅱ系列
輔酶ⅡNADP(H)含量測試盒50管/24樣 輔酶Ⅱ系列
輔酶ⅡNADP(H)含量測試盒100管/48樣 輔酶Ⅱ系列
Rat Ficolin-2酶聯(lián)免疫試劑盒 Rat Ficolin-2 ELISA Kit
Ractopamine酶聯(lián)免疫試劑盒 Ractopamine ELISA Kit
Quinolones酶聯(lián)免疫試劑盒 Quinolones ELISA Kit
Pig Ficolin-2酶聯(lián)免疫試劑盒 Pig Ficolin-2 ELISA Kit
Phenylbutazone酶聯(lián)免疫試劑盒 Phenylbutazone ELISA Kit
Mouse Ficolin-2酶聯(lián)免疫試劑盒 Mouse Ficolin-2 ELISA Kit
Human Heat shock protein beta-6酶聯(lián)免疫試劑盒 Human Heat shock protein beta-6 ELISA Kit
Human cleaved microtubule-associated protein tau酶聯(lián)免疫試劑盒 Human cleaved microtubule-associated protein tau ELISA Kit
Corticosteroid酶聯(lián)免疫試劑盒 Corticosteroid ELISA Kit
Clenbuterol酶聯(lián)免疫試劑盒 Clenbuterol ELISA Kit
Chloramphenicol酶聯(lián)免疫試劑盒 Chloramphenicol ELISA Kit
Bovine Ficolin-2酶聯(lián)免疫試劑盒 Bovine Ficolin-2 ELISA Kit
Boldenone酶聯(lián)免疫試劑盒 Boldenone ELISA Kit
Beta Lactams酶聯(lián)免疫試劑盒 Beta Lactams ELISA Kit
輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒100管/48樣Beta Agonists酶聯(lián)免疫試劑盒 Beta Agonists ELISA Kit
19-Nortestosterone酶聯(lián)免疫試劑盒 19-Nortestosterone ELISA Kit
斑馬魚胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1(IGFBP1)ELISA試劑盒
斑馬魚胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP3)ELISA檢測試劑盒
實驗方法學:
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。