堿性蛋白染色液公司正在銷售的產(chǎn)品：豚鼠腺苷酸環(huán)化酶1(ADCY1)試劑盒 Anti-MX2 Antibody鋅指FYVE結(jié)構(gòu)域蛋白27抗體
豚鼠間隙連接蛋白40(CX40)試劑盒 Anti-MYB Antibody受精卵抑制蛋白1抗體
豚鼠嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CYPA)試劑盒 Anti-MXD1 Antibody鋅指蛋白471抗體
豚鼠彈性蛋白微纖維界面蛋白1(EMILIN 1)試劑盒Anti-M

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產(chǎn)品分類：細(xì)胞染色

儲(chǔ)存條件：室溫,避光,12個(gè)月

用途：顯示細(xì)胞中堿性蛋白,尤其是組蛋白

注意事項(xiàng)：細(xì)胞核大部分被染成綠色。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來(lái)水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái)，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

前杯莧甾 Metalaxyl solutionGATA結(jié)合蛋白5抗體包裝1g

前胡（標(biāo)準(zhǔn)品） Fenitrothion生長(zhǎng)分化因子9抗體包裝250mg

芡實(shí)（標(biāo)準(zhǔn)品）  (2-Chloroethyl)trimethylammonium chloride促代謝型谷受體4抗體包裝5g

茜草（標(biāo)準(zhǔn)品） BrassinolideGST標(biāo)簽蛋白抗體包裝25g

茜雙酯（標(biāo)準(zhǔn)品） Acetamiprid磷脂?；鞍拙厶?4抗體包裝5g

羌活(寬葉羌活)（標(biāo)準(zhǔn)品） Carbendazim眼鏡蛇蛇蛋白抗體包裝1g

羌活（標(biāo)準(zhǔn)品） CarbarylGalNAc-T14抗體包裝250mg

羌活（標(biāo)準(zhǔn)品） Stachydrine hydrochloride骨形態(tài)形成蛋白拮抗蛋白2抗體包裝500mg

羥基紅花黃色A(標(biāo)準(zhǔn)品) Isosilybin甘油酰基轉(zhuǎn)移4抗體包裝1g

羥基積雪草苷（標(biāo)準(zhǔn)品） Theaflavin 3,3′-digallate葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白12抗體包裝250mg

羥基積雪草（標(biāo)準(zhǔn)品） Palmatine chloride hydrate顆粒溶抗體包裝1g

羥基酪；3,4-二羥基乙(標(biāo)準(zhǔn)品) N,O-Bis(trimethylsilyl)acetamide腦膠質(zhì)瘤相關(guān)蛋白抗體（鋅指蛋白5）包裝5g

羥基茜草/紅紫（標(biāo)準(zhǔn)品） N,O-Bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因gamma（GRＯγ）抗體包裝1g

喬松（標(biāo)準(zhǔn)品） TMS-Imidazole (=N-Trimethylsilylimidazole)G蛋白信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白2抗體包裝5g

茄（標(biāo)準(zhǔn)品） N,O-Bis(trimethylsilyl)acetamideG蛋白偶聯(lián)受體GPR142蛋白抗體包裝100g

嗜氣單胞菌Aeromonas│hydrophila 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRⅦ試劑盒馬錢苷;Loganin

炭疽芽孢桿菌Bacillus│anthracis 質(zhì)量規(guī)格：>98%Ⅴ試劑盒蒙花苷;Linarin

食芽孢桿菌Bacillus benzoevorans Pichinoty et al. 1987 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Ⅱ試劑盒馬錢苷;Loganic acid
堿性蛋白染色液LI-cadherin(liver-intestine cadherin)  肝腸鈣粘連蛋白抗原規(guī)格： 0.5mg

PDCD4(programmed cell death 4)  凋亡相關(guān)蛋白4抗原規(guī)格： 0.5mg

TFAR19(TF-1 cell apoptsis-related gene 19)  凋亡相關(guān)蛋白TFAR19抗原規(guī)格： 0.5mg

PCNA(phosphos Dyr211)peptide  磷suan化增殖細(xì)胞核多肽抗原規(guī)格： 0.5mg

PCX/PODXL(Podocalyxin)  足細(xì)胞特異蛋白抗原規(guī)格： 0.5mg

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來(lái)確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。