詳細(xì)介紹
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,具有高效,特異性強(qiáng),純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價(jià),而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
產(chǎn)品名稱 | 載脂蛋白M抗體 |
英文名稱 | ApoM |
規(guī)格 | 0.2ml |
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公司專業(yè)供應(yīng)的抗體,抗體是用于化學(xué)反應(yīng)、分析化驗(yàn)、研究實(shí)驗(yàn)、教學(xué)實(shí)驗(yàn)、化學(xué)配方使用的純凈化學(xué)品,產(chǎn)品品質(zhì),價(jià)格實(shí)惠,多種規(guī)格供應(yīng),售后完善??贵w的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,具有高效,特異性強(qiáng),純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進(jìn)行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價(jià),而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標(biāo)記技術(shù):
(一)原理
當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(NaI)遇強(qiáng)氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團(tuán)進(jìn)行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進(jìn)行鹵化反應(yīng)的基團(tuán)主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進(jìn)行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實(shí)驗(yàn)中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強(qiáng)揮發(fā)性的有機(jī)溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準(zhǔn)備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點(diǎn)
1.用胺T法進(jìn)行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進(jìn)行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點(diǎn)有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實(shí)驗(yàn)動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實(shí)驗(yàn)活體。
3、進(jìn)行動物免疫實(shí)驗(yàn)。
4、試取血樣進(jìn)行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實(shí)驗(yàn)活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
高峰淀粉酶來源于米曲霉(4000U/g) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:BR,4000u/g純度:98%
高峰淀粉酶來源于米曲霉(100U/mg ) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:BR,100 U/mg純度:≥98%
甘油醛3脫酶 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:BR,75U/MG純度:≥98%
菠蘿蛋白酶 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:>500U/MG,BR純度:≥98%
輔羧酶;羧化輔酶;焦素 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:>98%,BR純度:≥98%
吲哚乙 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:0.97純度:≥97%
α環(huán)糊精 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:>98%,BR純度:>98% >94%
氧化酶(XOD) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:BR,>7U/MG, powder純度:≥97%
?;?/font>,L氨基酰化酶 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:酶活力≥30000u/g純度:≥94%
胰蛋白酶1:250 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:>250U/mg,BR純度:≥95%
胰蛋白酶1:2500 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:>2500U/MG純度:≥95%
阿利多 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:>98%,BR純度:98%
核糖核酶A(美侖);RNase A;核糖核酶I 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:≥50 U/mg,美侖純度:98%
5‘吡哆醛,一水 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:>98%,BR純度:≥95%
NADPH;還原輔酶Ⅱ四鈉鹽;(羅氏) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:>95%,羅氏進(jìn)分純度:≥98%
NADPH;還原輔酶Ⅱ四鈉鹽;(美侖) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:>97%,國產(chǎn)美侖純度:≥98%
CARM1 蛋白精氨N基4一抗 * 0.1ml Agarose
BTN2A2 嗜乳脂蛋白亞家族2成員A2一抗 * 0.2ml PEG 400
AMPK alpha 1/PRKAA1 腺苷單活化蛋白激酶α1一抗 * 0.1ml Cholestyramine resin
phosphoAMPK alpha 1(Thr172) 化腺苷單活化蛋白激酶α1一抗 * 0.1ml Sucrose
TP53TG3 p53靶蛋白3一抗 * 0.2ml D(+)Trehalose, dihydrate
TP53TG5 p53靶蛋白5一抗 * 0.2ml Sodium chloride
TSPYL5 特異性Y蛋白樣5一抗 * 0.2ml Guanidine hydrochloride
UBTD1 泛素結(jié)構(gòu)域蛋白1一抗 * 0.2ml Adonitol
載脂蛋白M抗體Trichaptum abietinum (Dicks.) Ryvarden分離基物: 菌體提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 27存儲條件: 定期移植法
Saccharomyces cerevisiae提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 淀粉發(fā)酵制酒精。培養(yǎng)基: CM0077生長條件: 28-30℃存儲條件: 定期移植法
Lentinula edodes提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;礦物油法;定期移植法
Periconila vutina分離基物: 葉提供形式: 凍結(jié)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: CM0014生長條件: 25C存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié);礦物油法
Beauveria sp.提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 害蟲生物防治培養(yǎng)基: 14生長條件: 28存儲條件: 定期移植法
廢鹽田枝芽孢桿菌種屬: Virgibacillus chiguensis分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: yes應(yīng)用領(lǐng)域: 模式菌株培養(yǎng)基: 0885生長條件: 37℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Pseudomonas taetrolens分離基物: 污泥提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 分類、研究,具有用作耐重金屬基因資源潛力。培養(yǎng)基: 0002生長條件: 28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法;礦物油法
Bacillus thuringiensis subsp. thuringiensis提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 殺鱗翅目昆蟲培養(yǎng)基: 營養(yǎng)肉汁瓊脂: 3.0g,蛋白胨 10.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾水 1.0L,pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。121℃,15min。生長條件: 30℃,好氧存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Issatchenkia occidentalis分離基物: 生物樣/白骨壤/莖提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 近海酵母培養(yǎng)基: 513生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法