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產(chǎn)品分類：植物染色

儲(chǔ)存條件：—20℃,避光,6個(gè)月

用途：用于轉(zhuǎn)基因植物的GUS基因表達(dá)的簡(jiǎn)易檢測(cè)。

注意事項(xiàng)：染色原理是適宜的反應(yīng)條件下,β-葡萄糖苷酶(GUS)可將X-Gluc水解成藍(lán)色物質(zhì),該物質(zhì)不溶解于轉(zhuǎn)基因的細(xì)胞核組織中的靛藍(lán)物質(zhì),具有GUS活性的部位或位點(diǎn)呈現(xiàn)藍(lán)色或藍(lán)色斑點(diǎn),可用肉眼或顯微鏡觀察到。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來(lái)水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái)，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

Burkholderia metallica Vanlaere et al.促腎上腺皮質(zhì)激釋放因子抗體Human S100A10(Protein S100-A10) ELISA Kit人抗網(wǎng)硬蛋白抗體(ARA)免疫試劑盒

泡盛曲霉5號(hào)染色體開放閱讀框54抗體Human PRNP(Major prion protein) ELISA Kit人抗外切體復(fù)合物成分RRP45(EXOSC9)抗體免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌CD93抗體Human EGFL7(Epidermal growth factor-like protein 7) ELISA Kit人抗外切體成分10(EXOSC10)抗體免疫試劑盒

假單胞菌嗜粒趨化蛋白CCL6抗體Human STAT5B(Signal transducer and activator of transcription 5B) ELISA Kit人抗唾液腺導(dǎo)管組織抗體(SDA)免疫試劑盒

大莖點(diǎn)菌6號(hào)染色體開放閱讀框81抗體Human EBI3(Interleukin-27 subunit beta) ELISA Kit人抗脫氧核糖核蛋白抗體(DNP-Ab)免疫試劑盒

仁果叢梗孢巨噬炎性蛋白1β抗體Human LILRA2(Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily A member 2) ELISA Kit人抗突觸前膜抗體(PsmAb)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌NK抑制性受體2DL4抗體Human EGFL7(Epidermal growth factor-like protein 7) ELISA Kit人抗突變型瓜波形蛋白抗體(anti-MCV Ab)免疫試劑盒

澳型核果褐腐病菌NK抑制性受體2DS4抗體Human LILRB1(Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 1) ELISA Kit人抗透明帶抗體(aZP)免疫試劑盒

橄欖色盤多毛孢NK抑制性受體3DL1抗體Human ATP2A3(Sarcoplasmic/endoplasmic reticulum calcium ATPase 3) ELISA Kit人抗天然脫氧核糖核抗體(n-DNA-Ab)免疫試劑盒

黑曲霉7號(hào)染色體開放閱讀框46抗體Human ECE1(Endothelin-converting enzyme 1) ELISA Kit人抗糖蛋白抗體(GP)免疫試劑盒

白地霉蛋白磷PP2A癌抑制蛋白抗體Human NDNF(Protein NDNF) ELISA Kit人抗肽酰基精脫亞4型(PADI4)抗體 免疫試劑盒

岸海桿狀菌巨噬甘露糖受體CD206抗體Human IFNA14(Interferon alpha-14) ELISA Kit人抗髓鞘少突膠質(zhì)糖蛋白抗體(IgG)免疫試劑盒

淋巴衍生C-型凝集抗體Human C19orf10(UPF0556 protein C19orf10) ELISA Kit人抗髓磷脂相關(guān)糖蛋白(MAG)抗體免疫試劑盒

腸桿菌屬5號(hào)染色體開放閱讀框60抗體Human UBE3A(Ubiquitin-protein ligase E3A) ELISA Kit人抗髓磷脂抗體IgA(anti-myelin Ab)免疫試劑盒

霍氏腸桿菌CD44V5抗體Human PLA2G2A(Phospholipase A2, membrane associated) ELISA Kit人抗蘇?；鵷RNA合成,線粒體(TARS2)抗體免疫試劑盒

尖孢鐮刀菌22號(hào)染色體開放閱讀框23抗體Human TNFRSF10B(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10B) ELISA Kit人抗蘇?；鵷RNA合成,質(zhì)(TARS)抗體免疫試劑盒

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：用于液相色譜-質(zhì)譜的離子對(duì)試劑Ⅱ型膠原試劑盒大戟因子L1

大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：用于類的熒光離子對(duì)試劑Ⅱ型肺泡表面抗原試劑盒13-去羥基印烏堿

大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%28S抗核糖體抗體試劑盒新知母皂苷BII
GUS染色液MPO(Human myeloperoxidase) ELISA Kit  人髓過氧化物mei規(guī)格： 48T

Gzms-B(Human granzymes B) ELISA Kit  人顆粒meiB規(guī)格： 48T

Gzms-A(Human granzymes A) ELISA Kit  人顆粒meiA規(guī)格： 48T

CIAP(Human Calf intestinal alkaline phosphatase) ELISA Kit  人牛小腸性磷suanmei規(guī)格： 48T

SOD(Human Super Oxidase Dimutase) ELISA Kit  人超氧化物歧化mei規(guī)格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來(lái)確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。