詳細(xì)介紹
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動(dòng)物:常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,具有高效,特異性強(qiáng),純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià),而真空干燥保存時(shí)間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
產(chǎn)品名稱 | BRD3蛋白抗體 |
英文名稱 | BRD3 |
規(guī)格 | 0.2ml |
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公司專業(yè)供應(yīng)的抗體,抗體是用于化學(xué)反應(yīng)、分析化驗(yàn)、研究實(shí)驗(yàn)、教學(xué)實(shí)驗(yàn)、化學(xué)配方使用的純凈化學(xué)品,產(chǎn)品品質(zhì),價(jià)格實(shí)惠,多種規(guī)格供應(yīng),售后完善??贵w的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動(dòng)物
常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,具有高效,特異性強(qiáng),純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進(jìn)行保存。抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià),而真空干燥保存時(shí)間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標(biāo)記技術(shù):
(一)原理
當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(shí)(NaI)遇強(qiáng)氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團(tuán)進(jìn)行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進(jìn)行鹵化反應(yīng)的基團(tuán)主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進(jìn)行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實(shí)驗(yàn)中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強(qiáng)揮發(fā)性的有機(jī)溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準(zhǔn)備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點(diǎn)
1.用胺T法進(jìn)行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進(jìn)行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會(huì)對抗原的抗體結(jié)合位點(diǎn)有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動(dòng)物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實(shí)驗(yàn)活體。
3、進(jìn)行動(dòng)物免疫實(shí)驗(yàn)。
4、試取血樣進(jìn)行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實(shí)驗(yàn)活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
脂肪桿菌現(xiàn)貨,ATCC菌株
茄科雷爾氏菌培養(yǎng),ATCC菌株
葡萄球菌保存,ATCC菌株
馬鏈球菌獸瘟亞種(馬鏈球菌動(dòng)物傳染病亞 ..售價(jià),ATCC菌株
冷解糖芽孢桿菌現(xiàn)貨,ATCC菌株
食瓊脂類芽孢桿菌培養(yǎng),ATCC菌株
埃特*瘤菌保存,ATCC菌株
金黑小單胞菌售價(jià),ATCC菌株
磷肌醇-激酶2α肽(PI3K2α)ELISA Kit for Phosphoisitide-Kinase Class-Alpha Polypeptide (PIK3C2a)規(guī)格:48T/96T
糖原磷化酶L(PYGL)ELISA Kit for Glycogen Phosphorylase, Liver (PYGL)規(guī)格:48T/96T
顆粒酶B(GZMB)ELISA Kit for Granzyme B (GZMB)規(guī)格:48T/96T
脯酰羧肽酶(PRCP)ELISA Kit for Prolylcarboxypeptidase (PRCP)規(guī)格:48T/96T
核基質(zhì)蛋白4(NMP4)ELISA Kit for Nuclear Matrix Protein 4 (NMP4)規(guī)格:48T/96T
金屬蛋白1(MT1)ELISA Kit for Metallothionein 1 (MT1)規(guī)格:48T/96T
白介素6(IL6)ELISA Kit for Interleukin 6 (IL6)規(guī)格:48T/96T
干擾素α(IFNα)ELISA Kit for Interferon Alpha (IFNa)規(guī)格:48T/96T
胱天蛋白酶5(CASP5)ELISA Kit for Caspase 5 (CASP5)規(guī)格:48T/96T
淀粉樣前體蛋白(APP)ELISA Kit for Amyloid Precursor Protein (APP)規(guī)格:48T/96T
生長激素誘導(dǎo)跨膜蛋白(GHITM)ELISA Kit for Growth Hormone Inducible Transmembrane Protein (GHITM)規(guī)格:48T/96T
孕受體(PGR)ELISA Kit for Progesterone Receptor (PGR)規(guī)格:48T/96T
BRD3蛋白抗體釀酒酵母種屬: Saccharomyces cerevisiae提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0013生長條件: 25-28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Bacillus anthracis分離基物: 炭疽黃牛脾臟提供形式: 凍干物安全等級: 3模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 科研及血清定型培養(yǎng)基: 335生長條件: 37存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法;
泛酸枝芽孢桿菌種屬: Virgibacillus pantothenticus分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: yes應(yīng)用領(lǐng)域: 模式菌株培養(yǎng)基: NB生長條件: 30℃,好氧,48h存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Escherichia coli分離基物: 病鴨肝膽提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 抗藥性檢驗(yàn)培養(yǎng)基: 335生長條件: 37存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法;
大腸埃希氏菌種屬: Escherichia coli提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 防霉、抗菌。培養(yǎng)基: CM0002生長條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法;定期移植法
Streptomyces aureus提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0012生長條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Enterobacter sp.分離基物: 水稻葉片提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 用于水稻白葉枯病的生物防治培養(yǎng)基: 14生長條件: 30℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法
Aspergillus oryzae分離基物: 酒曲提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 大曲酒用。培養(yǎng)基: CM0085生長條件: 28-30℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法;定期移植法
Doratomyces microsporus提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25℃