詳細(xì)介紹
產(chǎn)品分類:核酸提取
儲(chǔ)存條件:室溫,6個(gè)月
用途:由組織胍和DEPC水組成。
注意事項(xiàng):避免RNA污染。
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點(diǎn),咨詢并訂購!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
組織胍溶液 | 100ml | FS-R7358 |
配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標(biāo)線,搖勻。
實(shí)驗(yàn)方法與判定:
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱;柱溫120℃;進(jìn)樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進(jìn)樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。
4.實(shí)驗(yàn)方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對照品的峰面積計(jì)算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗(yàn)證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細(xì)胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來實(shí)現(xiàn),至少選擇5個(gè)濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細(xì)胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密,其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,這取決于宿主細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
根瘤菌屬λ輕鏈抗體Human PDRG1 ELISA Kit透明質(zhì)結(jié)合蛋白2(HABP2)
糞產(chǎn)堿菌糞亞種溶體相關(guān)膜蛋白2抗體Human PDS5A ELISA Kit透明質(zhì)結(jié)合蛋白(HABP)
異常畢赤酵母肺腺瘤易感蛋白2抗體Human PDE6A ELISA Kit透明質(zhì)蛋白聚糖連結(jié)蛋白1(HAPLN1)
大腸埃希氏菌磷化RNA聚合相關(guān)蛋白LEO1抗體Human PDCD5 ELISA Kit透明質(zhì)(HA)
氣生馬賽菌腫瘤抑制基因LATS2抗體Human PDE6B ELISA Kit銅鋅-過氧化物岐化(SOD1)
褐橙指孢囊菌磷化白F肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體Human PXDN(Peroxidasin homolog) ELISA Kit銅藍(lán)蛋白(CP/CER)
鴨疫里氏桿菌磷化腫瘤抑制基因LATS2抗體Human PDCD6 ELISA Kit同源框A3(HOXA3)
灰色鏈霉菌磷化白F肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體Human PDCD6IP ELISA Kit同型半胱(Hcy)
膠凍樣芽胞桿菌白F肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體Human PDCL ELISA Kit鐵調(diào)25(Hepc25)
沙福芽孢桿菌亮鏈轉(zhuǎn)錄因子樣1抗體Human PDCD7 ELISA Kit鐵調(diào)(Hepc)
海小單孢菌層粘連蛋白B2γ1抗體Human PDK3 ELISA Kit鐵-過氧化物岐化(Fe-SOD)
阿氏芽孢桿菌磷化T活化連接蛋白抗體Human PDLIM3 ELISA Kit鐵蛋白重鏈(FTH)
木荷生德克斯酵母磷化T活化連接蛋白抗體Human PDLIM5 ELISA Kit鐵蛋白(Ferritin)
黃曲霉低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1抗體Human PDLIM7 ELISA Kit鐵蛋白(FE)
海科貝特氏菌磷脂?;D(zhuǎn)移2抗體Human PDP2 ELISA Kit調(diào)寧蛋白1(CNN1)
孔雀石綠鏈霉菌LRRFIP2蛋白抗體Human PDRG1 ELISA Kit天青殺/肝結(jié)合蛋白(AZU/HBP)
細(xì)黃鏈霉菌Streptomyces│microflavus 質(zhì)量規(guī)格:>85.0%(E)人參二
鹽單胞菌Halomonas│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>75.0%(HPLC)(T)原人參三
橄欖色盾殼霉Coniothyrium│olivaceum Bonord. 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(HPLC)(T)原人參二
組織胍溶液GP2(Mouse glucoprotein 2)ELISA Kit 小鼠抗核膜糖蛋白2規(guī)格: 48T
IL-7(Mouse Interleukin-7) ELISA kit 小鼠白介su7規(guī)格: 48T
MT(Mouse Melatonin) ELISA Kit 小鼠褪黑su規(guī)格: 48T
Apo-H(Mouse Apolipoprotein H) ELISA Kit 小鼠載脂蛋白H規(guī)格: 48T
HSF1(Mouse Heat Shock Factor 1) ELISA Kit 小鼠熱休克因子1規(guī)格: 48T