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產(chǎn)品分類：細(xì)胞培養(yǎng)

儲存條件  4℃,6個月

用途  調(diào)整細(xì)胞培養(yǎng)基中pH值

注意事項(xiàng)  無菌溶液,經(jīng)過濾除菌處理,注意無菌操作。

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購！

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對照品溶液的穩(wěn)定性

2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液，三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對照品的峰面積計(jì)算原對照品溶液的含量。記錄下來，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%，驗(yàn)證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

補(bǔ)體蛋白3(C3)C3 ELISA Kit血管生成相關(guān)蛋白5包裝5g

補(bǔ)體C4(C4)C4 ELISA Kit錨蛋白重復(fù)域53抗體包裝1g

補(bǔ)體1抑制物抗體(C1INH)C1INH ELISA Kit錨蛋白重復(fù)域54抗體包裝1g

波形蛋白(VIM)VIM ELISA Kiβ5抗體包裝1g

脫氫E1(PDH E1)PDH E1 ELISA Kit肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白3抗體包裝5g

激M2型同工(M2-PK)M2-PK ELISA Kit腺苷A2b受體/神經(jīng)生長因子1受體抗體包裝10MG

激(PK)PK ELISA Kit肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白1抗體包裝1g

二單酰(malonyl CoA)malonyl CoA ELISA Kitβ淀粉樣前體蛋白結(jié)合蛋白2抗體（X11β）包裝5g

二醛(MDA)MDA ELISA Kit乙酰結(jié)合蛋白抗體包裝100g

轉(zhuǎn)/谷轉(zhuǎn)(ALT/GPT)ALT/GPT ELISA Kit磷化分裂周期蛋白16抗體包裝25g

轉(zhuǎn)(ALT)ALT ELISA Kit白血病相關(guān)蛋白AHI1抗體包裝1g

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表皮生長因子(EGF)EGF ELISA Kit三磷腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白9抗體包裝1g

吡啶交聯(lián)物(PY)PY ELISA KitADP核糖基化因子3抗體包裝100g

(LPA)LPA ELISA Kit含酰tRNA合成結(jié)構(gòu)域1抗體包裝25g

通道蛋白-2抗體骨成型蛋白2(BMP2)Idelalisib (CAL-101; GS-1101) 是一種口服有效的高選擇性 p110δ 抑制劑，IC50 為 2.5 nM，比 p110δ 和其他 P
碳酸氫鈉溶液DCN/FITC  熒光標(biāo)記抗核心蛋白聚糖IgG橡膠PTFE墊片,配套120ZSS棕色瓶,φ20mm*1.4mm

DCP/FITC  熒光標(biāo)記異常凝血原/脫-γ-羧凝血原IgG中空純四氟塞,配套120ZSS玻璃瓶,φ18*18

DCP /HRP  辣根過氧化物標(biāo)記異常凝血原/脫-γ-羧凝血原IgG橡膠覆PTFE墊片,匹配30Zss黑色低蓋,φ18*1.5

DCX/FITC  熒光標(biāo)記雙皮質(zhì)IgG橡膠覆PTFE墊片,匹配500MLZPA棕色瓶低蓋,φ25.5*1.5

Phospho-Doublecortin (Ser297) /FITC  熒光標(biāo)記兔抗人、大、小鼠等化雙皮質(zhì)IgG500ZPA四氟柱塞,匹配500MLZPA棕色瓶,Ф23*27.7 ,

D-DIMER/FITC  熒光標(biāo)記交聯(lián)纖維蛋白二聚體IgG30ZSS中空四氟塞,φ16*17.3

DDAH-II /FITC   熒光標(biāo)記雙精氨水解2IgGPTFE墊片,匹配2ml棕色螺紋玻璃瓶和瓶蓋,φ9*1.5

DDB1/FITC  熒光標(biāo)記損傷DNA結(jié)合蛋白1IgGPTFE墊片,匹配3ml棕色螺紋玻璃瓶和瓶蓋,φ11.8*1.5