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人血管內(nèi)皮

產(chǎn)品分類：免疫組化

儲(chǔ)存條件：室溫,12個(gè)月

用途：多用于免疫組化和細(xì)胞染色

注意事項(xiàng)：生物學(xué)和醫(yī)學(xué)上經(jīng)常用的一種磷酸緩沖液,主要由磷酸氫二鈉和磷酸二氫鉀組成。溶于水后PH約為7.2-7.4。

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購！

 

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對照品溶液的穩(wěn)定性

2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對照品的峰面積計(jì)算原對照品溶液的含量。記錄下來，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%，驗(yàn)證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

細(xì)黃鏈霉菌G基丁受體γ3/GABAA Rγ3抗體Human VAPB ELISA Kit猴超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)免疫試劑盒

水生鞘單胞菌G基丁受體ε/GABAA Rε抗體Human VAMP5 ELISA Kit猴補(bǔ)體片斷3b(C3b)免疫試劑盒

球孢白僵菌γ-基丁受體相關(guān)蛋白抗體Human VAMP4 ELISA Kit猴補(bǔ)體蛋白5(C5)免疫試劑盒

鏈霉菌G基丁A型受體θ/GABAA Rθ抗體Human VARS2 ELISA Kit猴白介6(IL-6)免疫試劑盒

米曲霉G基丁A型受體rho1 /GABAA Rρ1抗體Human VAMP7/TI-VAMP ELISA Kit猴白介2(IL-2)免疫試劑盒

水生屈曲桿菌G基丁A型受體rho2 /GABAA Rρ2抗體Human VANGL1 ELISA Kit猴白介1a(IL1A)免疫試劑盒

大孢子鏈霉菌G基丁B型受體結(jié)合蛋白抗體Human VAMP8 ELISA Kit猴γ干擾(IFN-γ)免疫試劑盒

Winogradskyella damuponensis 谷受體δ1/GluR-δ1抗體Human VANGL2 ELISA Kit猴β干擾(IFN-β)免疫試劑盒

茶云紋葉枯病谷受體相關(guān)蛋白1抗體Human UTP3 ELISA Kit猴β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)免疫試劑盒

輪枝菌（大豆胞囊線蟲卵寄生真菌）環(huán)磷鳥苷門控通道蛋白CNG4抗體Human UTP6 ELISA Kit猴α干擾(IFN-α)免疫試劑盒

粘蓋牛肝菌*甘受體α1+甘受體α2抗體Human VAPA ELISA Kit猴slit同源物2(果蠅)(SLIT2)免疫試劑盒

巴斯德畢赤酵母甘受體α3/GlyR α3抗體Human UVRAG ELISA Kit猴E選擇(E-Selectin/CD62E)免疫試劑盒

釀酒酵母G蛋白偶聯(lián)受體C5家族亞型D抗體Human UTP23 ELISA Kit猴CD34分子(CD34)免疫試劑盒

青霉G蛋白偶聯(lián)受體18抗體Human UTP6 ELISA Kit猴B病(BV)免疫試劑盒

土曲霉G蛋白偶聯(lián)受體65抗體Human UTP3 ELISA Kit猴25羥基維生D3(25 HVD3)免疫試劑盒

腸膜明串珠菌生長終止特異性同源盒基因抗體Human UVRAG ELISA Kit大鼠

火木層孔菌Phellinus│igniarius 質(zhì)量規(guī)格：藥用級苷H

輪蟲弧菌Vibrio│rotiferianus 質(zhì)量規(guī)格：0.98野漆樹苷

發(fā)酵乳桿菌Lactobacillus│fermentum 質(zhì)量規(guī)格：≥98.0%百兩金A
PBS磷酸鹽緩沖液ALDH ELISA Kit  大鼠乙醛脫氫mei規(guī)格： 48T

sCD14 ELISA Kit  大鼠可溶性CD14規(guī)格： 48T

MIS/AMH)ELISA Kit  大鼠繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激su規(guī)格： 48T

androgen ElISA Kit  大鼠雄激su規(guī)格： 48T

TLR4 ELISA Kit  大鼠Toll樣受體4規(guī)格： 48T