詳細(xì)介紹
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
產(chǎn)品名稱 | 自噬相關(guān)蛋白8A抗體 |
英文名稱 | APG8A |
規(guī)格 | 0.2ml |
?
公司專業(yè)供應(yīng)的抗體,抗體是用于化學(xué)反應(yīng)、分析化驗、研究實驗、教學(xué)實驗、化學(xué)配方使用的純凈化學(xué)品,產(chǎn)品品質(zhì),價格實惠,多種規(guī)格供應(yīng),售后完善??贵w的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進(jìn)行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標(biāo)記技術(shù):
(一)原理
當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團(tuán)進(jìn)行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進(jìn)行鹵化反應(yīng)的基團(tuán)主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進(jìn)行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準(zhǔn)備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進(jìn)行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進(jìn)行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進(jìn)行動物免疫實驗。
4、試取血樣進(jìn)行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
內(nèi)皮細(xì)胞生長因子5mLGrowth Factor For Cell Culture*-20℃保存
內(nèi)毒素清除親和介質(zhì)5mLEndotoxin Removal Resin*4℃保存
內(nèi)毒素清除親和介質(zhì)50mLEndotoxin Removal Resin*4℃保存
腦心浸液500gBacto Brain Heart Infusion*4℃保存
腦膜炎細(xì)菌多重PCR檢測試劑盒50T* 低溫運輸,-20℃保存
腦膜炎奈瑟菌通用型PCR檢測試劑盒50T* 低溫運輸,-20℃保存
腦膜炎奈瑟菌CR檢測試劑盒50T* 低溫運輸,-20℃保存
腦膜炎奈瑟菌CR檢測試劑盒50T* 低溫運輸,-20℃保存
腦膜炎病毒多重PCR檢測試劑盒50T* 低溫運輸,-20℃保存
腦膜細(xì)胞生長因子5mLGrowth Factor For Cell Culture*-20℃保存
pPink HC2 ugpPink HC* 低溫運輸,-20℃保存
pPICZα GB2 ugpPICZα GB* 低溫運輸,-20℃保存
pPICZα GA2 ugpPICZα GA* 低溫運輸,-20℃保存
pPICZα FC2 ugpPICZα FC* 低溫運輸,-20℃保存
pPICZα E2 ugpPICZα E* 低溫運輸,-20℃保存
pPICZα D2 ugpPICZα D* 低溫運輸,-20℃保存
pPICZα C2 ugpPICZα C* 低溫運輸,-20℃保存
pPICZα B2 ugpPICZα B* 低溫運輸,-20℃保存
pPICZα A2 ugpPICZα A* 低溫運輸,-20℃保存
pPICZ C2 ugpPICZ C* 低溫運輸,-20℃保存
自噬相關(guān)蛋白8A抗體海生紅球菌種屬: Rhodococcus marinonascens提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: yes應(yīng)用領(lǐng)域: 模式菌株培養(yǎng)基: 0223生長條件: 17℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
耐鹽芽孢桿菌種屬: Bacillus halodurans提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: yes應(yīng)用領(lǐng)域: 模式菌株培養(yǎng)基: 0864生長條件: 37℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Streptomyces galbus分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 分類 研究培養(yǎng)基: 0012生長條件: 30℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;礦物油法
Metarhizium anisopliae (Metschn.) Sorokīn分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 25存儲條件: 定期移植法
Bacillus thuringiensis subsp. Kurstaki提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 生物防治; 防治多種鱗翅目昆蟲培養(yǎng)基: CM0831生長條件: 30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法
Aspergillus candidus提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 糖化淀粉用。培養(yǎng)基: CM0085生長條件: 28-30℃存儲條件: 定期移植法;其他
Paenibacillus polymyxa分離基物: 紅麻土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 分類 研究培養(yǎng)基: 0002生長條件: 32℃存儲條件: 真空冷凍干燥法;礦物油法;定期移植法
大毛霉種屬: Mucor mucedo分離基物: 豬糞提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 192生長條件: 25-28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法
Bacillus safensis分離基物: 水樣/海水提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 環(huán)境微生物研究,抗菌活性物質(zhì)研究培養(yǎng)基: 471生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法