Real-time PCR Mixture公司正在銷售的產(chǎn)品：Anti-SEMA4D Antibody人抗BP180抗體
Anti-SENP1 Antibody大鼠間粘附分子3
Anti-SENP2 Antibody大鼠纖溶酶原激活物抑制因子1
Anti-SENP7 Antibody人抗BB抗體
Anti-SENP7 Antibody小鼠皮質(zhì)
Anti-SENP3 Antibody人抗平滑肌抗體

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購(gòu)！

產(chǎn)品分類：PCR相關(guān)

儲(chǔ)存條件：—20℃,12個(gè)月

用途：專用于染料法（SYBR GreenⅠ）實(shí)時(shí)熒光定量PCR的預(yù)混體系，濃度為2×，包含GoldStar Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I熒光染料、Mg 2+ 和校正染料ROX，操作簡(jiǎn)單方便。主要用于基因組DNA靶序列和RNA反轉(zhuǎn)錄后cDNA靶序列的檢測(cè)。

注意事項(xiàng)：含有的熒光染料SYBR Green I可以與所有的雙鏈DNA結(jié)合，使該產(chǎn)品可用于不同靶序列的檢測(cè)而不需合成特異性標(biāo)記探針；

含有的GoldStar?

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

植物乳桿菌植物亞種磷化中心粒蛋白Nudel抗體Human TLR2(Toll-like receptor 2) ELISA Kit基質(zhì)金屬蛋白5(MMP-5)

吸水鏈霉菌磷化中心粒蛋白Nudel抗體Human TLR3(Toll-like receptor 3) ELISA Kit基質(zhì)金屬蛋白4(MMP-4)

pMV306hsp+LuxG13（addgene26161）線粒體復(fù)合物NDUFS4蛋白抗體Human TNFβ(Tumor Necrosis Factor Beta) ELISA Kit基質(zhì)金屬蛋白3/基質(zhì)裂解1(MMP3/STR1)

豌豆根瘤菌NADH脫氫α家族8抗體Human VEGFR2/KDR(Vascular endothelial growth factor receptor 2) ELISA Kit基質(zhì)金屬蛋白3(MMP-3)

枯草芽孢桿菌NADH脫氫黃蛋白1抗體Human TNFRSF11A/RANK(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 11A) ELISA Kit基質(zhì)金屬蛋白25(MMP25)

立枯絲核菌NADH脫氫黃蛋白2抗體Human TNFRSF14/HVEM(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14) ELISA Kit基質(zhì)金屬蛋白2/明膠A(MMP-2/Gelatinase A)

多主葡萄殼菌NADH氧化還原輔1抗體Human TNFRSF9/4-1BB(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9) ELISA Kit基質(zhì)金屬蛋白2(MMP-2)

食鹿角菜假交替單胞菌膜內(nèi)在蛋白NOD26抗體Human TNFSF13/APRIL(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 13) ELISA Kit基質(zhì)金屬蛋白1原(Pro-MMP-1)

番茄枯萎病菌磷化谷受體2B抗體Human TNFRSF4/OX40(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4) ELISA Kit基質(zhì)金屬蛋白14(MMP-14)

膠凍樣類芽孢桿菌磷化谷受體2A+2B抗體Human TNFRSF5/CD40(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5) ELISA Kit基質(zhì)金屬蛋白13(MMP-13)

頂孢霉高度相似的周期蛋白激NEK6抗體Human TNFSF11/RANKL(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 11) ELISA Kit基質(zhì)金屬蛋白12(MMP-12)

枯草芽孢桿菌A型流感病-NS1抗體（神經(jīng)1）Human TNFSF4/OX40L(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 4) ELISA Kit基質(zhì)金屬蛋白11(MMP11)

高山被孢霉去甲腎上腺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白/神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺轉(zhuǎn)運(yùn)體抗體Human TNFSF14/LIGHT(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 14) ELISA Kit基質(zhì)金屬蛋白10(MMP-10)

構(gòu)巢曲霉磷化一氧化氮合成3（內(nèi)皮型）抗體Human TNFSF18(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 18) ELISA Kit基質(zhì)金屬蛋白1(MMP-1)

草生毛霉新的飽食分子蛋白抗體Human TGFBR2(TGF-beta receptor type-2) ELISA Kit基質(zhì)γ羧基谷蛋白(MGP)

小孢根霉須狀變種脊髓灰質(zhì)炎病受體相關(guān)蛋白4抗體Human TGFβ1(Transforming Growth Factor Beta 1) ELISA Kit基膜聚糖/內(nèi)腔蛋白(LUM)

炭疽芽胞桿菌Bacillus│anthracis 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品丹參IIA

蛇孢霉屬Polyscytalum│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR丹B

灰藤黃鏈霉菌Streptomyces│griseoluteus 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR丹A
Real-time PCR MixtureSAA(Mouse Serum amyloid A)ELISA Kit  小鼠血清淀粉樣蛋白A規(guī)格： 48T

ACA(Mouse centrol and centrosome antibody)ELISA Kit  小鼠抗中性粒/中心體規(guī)格： 48T

Hpt/HP(Mouse Haptoglobin)ELISA Kit  小鼠結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白規(guī)格： 48T

16- Alpha OHE-1(Mouse 16- AlphaHydroxyestrogen 1)ELISA Kit  Hpt/HP小鼠16α羥基雌tong1規(guī)格： 48T

Alpha1-AGP(Mouse Alpha1-Acid glycoprotein)ELISA Kit  小鼠α1suan性糖蛋白規(guī)格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對(duì)于需要更高密度來檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。